Análisis de la cinética de pérdida del plásmido recombinante pTG201 en celulas de E. coli libres e inmovilizadas

Abstract

Se han inmovilizado células de Escherichia coli, cepas K12 (rec+) y HBlOl (recA-), portadoras del plásmido recombinante pTG201, con el fin de comparar la estabilidad y la expresión de los genes plasmídicos en diversas condiciones de cultivo. Para ello se han utilizado cultivos continuos (quimiostatos) con medio BL en presencia de diferentes tensiones de oxígeno. Paralelamente se han llevado a cabo experimentos con células libres. El análisis estadístico de las respectivas cinéticas de pérdida del plásmido revela una mayor estabilidad en células inmovilizadas en presencia de oxígeno puro, la cual se acompaña de una mayor producción de proteínas codificadas por el plásmido. Asimismo se ha estudiado la influencia de las condiciones de cultivo sobre el crecimiento microbiano en el gel y su relación con la estabilidad plasmídica.

Cells of Escherichia coli, strains K12 (rec+) and HBlOl (recA-), carrying the recombinant plasmid pTG201 were immobilized in order to study the stability and expression of plasmid genes in several culture conditions. Continuous cultures (chemostats) with BL medium and different oxygen tension were tested. Parallel experiments were carried out with free cells. The statistical analysis of the kinetics of plasmid loss showed a better plasmid stability in immobilized cells cultured in the presence of pure oxygen. In the last case a maximal production of protein codified by plasmid also occur. Likewise the influence of culture conditions over the microbial growth in the gel and their relation to plasmid stability has also been studied.