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    Análisis del programa de Test Genético Preimplantacional de Enfermedades Monogénicas (PGT-M) de la unidad de Reproducción Asistida del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca de Murcia
    (Universidad de Murcia, 2024-10-07) Torres González, Inmaculada; Nieto Díaz, Aníbal; Avilés Sánchez, Manuel; Escuela Internacional de Doctorado
    INTRODUCCIÓN: Las enfermedades monogénicas tienen una baja prevalencia en la población. Esta prevalencia difiere dependiendo del tipo de enfermedad, zona geográfica, sexo o grupo étnico, pero debido al gran impacto que tienen estas enfermedades a nivel familiar, en la salud y la calidad de vida de los pacientes que las padecen, son susceptibles de los tratamientos de PGT-M con el objetivo de seleccionar los embriones no afectos para su transferencia al útero materno. En la realización de dichos tratamientos en el laboratorio se pueden llevar a cabo distintos procedimientos y técnicas que pueden influir en las tasas de nacidos. OBJETIVOS: Describir y analizar los resultados del programa de PGT-M de la Región de Murcia realizados en el Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca, durante los últimos 10 años, desde la puesta en marcha del programa de diagnóstico preimplantacional, en el año 2014 hasta el 31 de enero de 2024, con el fin de proponer acciones para optimizar la gestión de recursos y los resultados del programa para aumentar el número de niño sano en casa. MATERIAL Y MÉTODOS: Se realizó un estudio observacional, descriptivo y retrospectivo de los tratamientos de PGT-M realizados a pacientes con diagnóstico genético de portadores o afectos de enfermedades monogénicas, realizados por la Unidad de Reproducción Asistida (URA) del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) desde el año 2014 hasta el 31 de enero de 2024. Los criterios de inclusión en el programa fueron: pacientes con diagnóstico confirmado con identificación del gen implicado o mutación causante del trastorno que debe ser grave. Las pacientes deben ser menores de 40 años, con un índice de masa corporal menor de 32 y una hormona antimülleriana mayor de 1 ng/ml, sin ningún hijo en común previo sano. Los datos para el análisis de las variables se recogieron del programa V Repro, previa digitalización de un total de 130 tratamientos, a partir del cual se creó la base de datos para el análisis estadístico de las variables. Los datos demográficos y diagnósticos genéticos se obtuvieron de la historia clínica informatizada en SELENE. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: La población sometida a PGT-M estuvo representada por un 57,1% de mujeres portadoras o afectas, un 34% de varones portadores o afectos y un 15,9% de portadores de ambos miembros de la pareja. La edad media de las pacientes fue de 33,85±3,59, el 63,8% de las pacientes era menor de 35 años. El grupo étnico caucásico se dio en el 95,12% de los casos, no teniendo parentesco común en el 96,75% de los casos. Por tanto, los resultados muestran que la mayoría de los tratamientos han sido realizados a mujeres, portadoras o afectas de las enfermedades monogénicas, menores de 35 años, y el grupo étnico mayoritario ha sido el caucásico. La tasa de fecundación total fue del 70,23%, con una tasa de blastocisto del 49,15%. La media de embriones biopsiados en el programa de PGT-M fue del 4,20±2,90. La tasa de gestación clínica total fue del 34,10%, con una tasa de aborto del 16,95% y una tasa de implantación del 31,05%. El laboratorio de la URA del HCUVA tuvo una tasa de fecundación del 65,36%, una tasa de blastocisto del 64,58%, y biopsiando una media de 2,77±2,01 embriones, con una tasa de gestación clínica del 48,48%, y una tasa de aborto del 6,25%. En el análisis de los procedimientos y técnicas utilizadas se observa que todos los laboratorios alcanzan los valores de calidad recomendados por las sociedades científicas (ASEBIR y ESHRE), aunque el protocolo seguido por la URA del HCUVA ha sido el más eficiente. El análisis estadístico al estudiar la tasa de gestación clínica dependiendo del día en el que se realizó la biopsia embrionaria fue del 44% para el D+5. Al analizar el tipo de transferencia embrionaria se observó una tasa de gestación del 37,5% cuando se realizaba en un ciclo en diferido. Por tanto, estos resultados demuestran que la biopsia embrionaria debería realizarse siempre en estadio de blastocisto y la transferencia embrionaria en un ciclo diferido. Por otra parte, al analizar la tasa de aneuploidía en embriones en relación con el número de ovocitos recuperados, estadísticamente se observa una correlación moderada entre el número de ovocitos y el número de embriones aneuploides. Dicha correlación no se encuentra cuando se compara con la edad de la paciente, los días de estimulación y la dosis total de gonadotropinas. Por tanto, serían necesarios más estudios para corroborar una posible relación de las aneuploidías con la edad de la paciente, duración de la estimulación y la dosis total de gonadortropinas. El estudio económico del programa de PGT-M muestra un ahorro de 7.003,92 € por tratamiento realizado, respecto al primer concierto del SMS (2014-2018), y de 2.273,01 € por tratamiento, si lo comparamos con el segundo concierto del SMS (2018-2023). Además, los resultados al estudiar la estrategia de realizar un programa de PGT-M+A muestran una tendencia positiva, sin diferencias significativas, con una tasa de gestación de 43,2%, frente al 31,6% y una tasa de aborto del 6,2% frente al 20,9%. La gestión de recursos económicos llevada a cabo desde la puesta en marcha del laboratorio de la URA, ha sido la más eficaz desde el comienzo del programa de PGT-M, siendo, en principio, la estrategia de un programa de PGT-M+A la correcta, aunque más estudios en esta línea podrían corroborar o refutar estos resultados en un futuro. Finalmente, el catálogo de enfermedades susceptibles de PGT-M podrá servir como guía de consulta en la Región de Murcia.
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    Avances en el conocimiento de la dinámica de la materia orgánica dentro de un contexto agroecológico
    (Murcia: servicio de publicaciones de la Universidad de Murcia, 2012) Labrador, Juana
    La materia orgánica representa la principal reserva edáfica de carbono. Su participación en moléculas que poseen composición y propiedades diferenciadas, le hacen responsable de actividades fundamentales en el suelo; su colaboración en y con la vida edáfica crean un conjunto de propiedades emergentes que generan resiliencia, conservación y promueven la fertilidad, productividad y la biodiversidad de los suelos. A pesar de la evidencia histórica de su importancia, el reconocimiento de su papel en la dinámica del suelo ha sido fluctuante y ha estado unido a las incertidumbres procedentes del conocimiento científico y de contextos culturales cambiantes, dándose en los últimos cincuenta años, los mayores avances en el conocimiento de su naturaleza y de sus funciones gracias a los progresos en ecológica microbiana y en los procesos analíticos e instrumentales. Paradójicamente, a pesar de éstos avances, el paradigma agronómico, ha asumido de forma sesgada su papel traduciendo sus múltiples funciones a un balance simplista de unidades fertilizantes. Por el momento sólo la agroecología mantiene un marco teórico robusto y abierto a nuevas aportaciones desde el conocimiento científico y experimental, que reconoce la multifuncionalidad de la materia orgánica en los agrosistemas y los expresa en prácticas y manejos de enorme eficiencia agrosistémica.
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    Comunicación materno-embrionaria y sus consecuencias en el desarrollo embrionario en bovino= Maternal-embryo interaction and consequences for embryo development in cattle
    (2014-07-14) Maillo Sevilla, Verónica; Rizos, Dimitrios; Lonergan, Patrick; Facultad de Veterinaria
    El objetivo de esta tesis ha sido estudiar la comunicación materno-embrionaria y sus consecuencias en el desarrollo embrionario. Para ello, se emplearon novillas Holstein primíparas postparto secadas (n=10) u ordeñadas (n=11) y se recogieron muestras de sangre dos veces por semana desde 15 días antes del parto hasta 100 días después, para medir ácidos grasos no-esterificados, β-hidroxibutirato, glucosa, insulina y factor de crecimiento insulínico tipo 1. Alrededor del día 60 (d60) postparto, se transfirieron 65 embriones in vitro, entre 2-4 células, al oviducto ipsilateral al cuerpo lúteo (CL) a todas las vacas en el d2 del ciclo estral, para observar el desarrollo embrionario cinco días después. Pasado el d90 postparto, se transfirieron 15-20 blastocistos in vitro al útero en d7, recuperándose el d14 tras sacrificarlas. El peso y la condición corporal fueron diferentes entre los grupos durante el estudio. Las vacas lactantes presentaron unos niveles altos de ácidos grasos no-esterificados y β-hidroxibutirato y bajos de glucosa, insulina y factor de crecimiento insulínico tipo 1 comparados con las no lactantes. En las vacas lactantes se recuperaron menos embriones en estadio de blastocisto comparado con las no lactantes. Sin embargo, la supervivencia embrionaria y el tamaño del concepto el d14 fue igual entre ambos grupos. Como conclusión, el tracto reproductivo de las vacas lactantes tiene una menor capacidad para mantener el desarrollo embrionario temprano comparado con las no lactantes. A continuación, se sincronizaron novillas de carne y las que presentaron celo (Día 0) se dividieron en cíclicas (no inseminadas, n=6) o gestantes (inseminadas artificialmente, n=11). Después de sacrificarlas (d3), ambos oviductos se diseccionaron, dividiéndose en ámpula e istmo. Cada porción se lavó para confirmar la presencia del ovocito/embrión y se abrió para obtener las células oviductales, que se congelaron en nitrógeno líquido para realizar un microarray. Todos los ovocitos/embriones se localizaron en el istmo del oviducto ipsilateral. El microarray de las células reveló que el embrión no afecta el transcriptoma del oviducto. Sin embargo, existe una gran diferencia entre el ámpula y el istmo del oviducto ipsilateral en novillas gestantes. Así, 2287 genes se expresaron de forma diferente: 1132 estaban sobre-expresados y 1155 menos expresados en el istmo. El análisis ontológico mostró que algunos de los procesos biológicos más representados en el istmo eran: síntesis de nitrógeno, lípidos, nucleótidos, esteroides y colesterol, transporte mediado por vesículas, ciclo celular, apoptosis, endocitosis y exocitosis. En el ámpula fueron: movimiento celular, motilidad y migración, reparación de ADN, homeostasis del calcio, biosíntesis de carbohidratos y regulación del movimiento y frecuencia del batido ciliar. En resumen, pese a las grandes diferencias entre el transcriptoma de istmo y ámpula, los datos sugieren que el embrión no altera la expresión de las células del istmo, aunque no se puede descartar un efecto localizado en el lugar concreto donde estaba el embrión. Finalmente, se trataron novillas de carne sincronizadas (n=43) con una dosis de solución salina el d1 (control) o 3000UI los días 1, 2, 3, o 4 después del celo. La hCG en el d1 no tuvo efecto ni en el CL ni en la concentración de progesterona. Sin embargo, el tratamiento los días 2, 3, o 4 incrementó el CL desde el día 6-12, 9-11, y 9 y 10, respectivamente (P<0.05), acompañado por un incremento en la progesterona, desde el día 6-11 (hCG d2) y desde el día 8-13 (hCG d4) (P<0.05). En d4, la hCG indujo la formación de un CL accesorio en el 89% de las novillas. Para concluir, la administración de hCG el d2 después del celo conlleva un incremento de progesterona en la circulación desde el d6, que podría beneficiar la elongación del concepto. The objective of this thesis was to study embryo-maternal interaction and its consequences on embryo development. Post-calving primiparous Holstein heifers were dried off (n=10) or milked (n=11). Blood samples were taken twice per week from 15 d before calving to 100 d postpartum to measure nonesterified fatty acids, β-hydroxybutyrate, glucose, insulin and insulin-like growth factor-I. Around 60 d postpartum, approximately 65 two- to four-cell embryos, produced in vitro, were endoscopically transferred to the oviduct ipsilateral to the corpus luteum (CL) of all cows on Day 2 of the estrous cycle. Five days later, the oviduct and uterus were flushed and blastocysts were recorded. After 90 d postpartum, 15 to 20 in vitro-produced blastocysts were transferred to the uterus of each cow on Day 7 and recovered after slaughter on Day 14. Body weight and body condition score were significantly different between groups during the study. Nonesterified fatty acids and β-hydroxybutyrate were higher and glucose, insulin and insulin-like growth factor-I were lower in lactating compared to nonlactating cows. Fewer embryos developed to the blastocyst stage on Day 7 in lactating compared with the nonlactating cows. However, embryo survival and conceptus size on Day 14 were not different between lactating and nonlactating cows. In conclusion, the reproductive tract of the lactating dairy cow is compromised in its ability to support early embryo development compared with nonlactating cows. Then, cross-bred beef heifers were synchronized and those in standing oestrus (=Day 0) were assigned to cyclic (non bred, n=6), or pregnant (artificially inseminated, n=11) groups. After slaughter on Day 3 both oviducts were isolated and divided in ampulla and isthmus. Each portion was flushed to confirm the presence of an oocyte/embryo and opened longitudinally to obtain epithelial cells. Cells were snap-frozen in liquid nitrogen for microarray analysis. All recovered oocytes/embryos were located in the isthmus of the ipsilateral oviduct. Microarray analysis of oviductal cells revealed that the presence of an embryo did not affect the oviduct transcriptome. However, major differences existed between the ampulla and isthmus of the oviduct ipsilateral to the CL. Thus, 2287 genes were differentially expressed (P<0.01) of which 1132 and 1155 were up- and down-regulated in the isthmus, respectively. Gene ontology revealed that some of the biological processes overrepresented in the isthmus were: synthesis of different compounds, vesicle-mediated transport, cell cycle, apoptosis, endocytosis and exocytosis; whereas cell motion, motility and migration, DNA repair, calcium ion homeostasis, carbohydrate biosynthetic process and regulation of cilium movement and beat frequency were overrepresented in the ampulla. In conclusion, while large differences in gene expression were observed between the isthmus and ampulla, data suggest that the presence of an embryo does not alter the transcriptome of the cells of the isthmus, although a local effect at the precise position of the embryo cannot be ruled out. Finally, synchronized cross-bred beef heifers (n=43) were administered with saline on Day 1 (control) or 3000 IU hCG on Day 1, 2, 3, or 4 after oestrus. hCG on Day 1 had no effect neither on CL area nor progesterone concentration. However, treatment on Day 2, 3 or 4 increased CL area from Day 6 to 12, 9 to 11, and on Day 9 and 10, respectively (P<0.05). This was accompanied by an increase in progesterone, from Day 6 to 11 (hCG Day 2) and from Day 8 to 13 (hCG Day 4) (P<0.05). Injection of hCG on Day 4 induced the formation of accessory CL in 89% of heifers. In conclusion, administration of hCG at Day 2 after oestrus results in increased progesterone in circulation from D6, which should have beneficial effect on conceptus elongation.
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    Eficacia de la terapia con antioxidantes ácidos grasos omega-3 y combinados en el varón subfértil con astenospermia idiopática que precisa de técnica de reproducción asistida
    (2016-06-15) López Martínez, Consuelo; López López, Eugenio; Nieto Díaz, Aníbal; Escuela Internacional de Doctorado
    Objetivos: Valorar si los antioxidantes orales administrados a varones subfértiles con astenospermia idiopática son eficaces para mejorar los parámetros seminales y las tasas de embarazo tras realizar Técnicas de Reproducción Asistida (TRA), bien IAC ó ICSI. - Principales: valoración de parámetros clínicos: tasa de recién nacido vivo sano (RNVS), nacido viable, embarazo clínico y bioquímico. - Secundarios: valoración de parámetros seminales, concentración y movilidad progresiva espermática. Valoración de parámetros de laboratorio ovocitarios y embrionarios. Valoración de efectos adversos medicamentosos y gestacionales (tasa de aborto). Metodología: Estudio clínico realizado en 179 parejas estériles con indicación de TRA (IAC ó ICSI), únicamente por causa masculina: astenospermia idiopática leve o severa. Se efectuaron 259 ciclos de TRA: 162 de ICSI y 97 de IAC. Estudio clínico abierto, prospectivo, randomizado, doble ciego y unicéntrico. Se analizan tres grupos de estudio: A) control o no tratamiento del varón (129 ciclos). B) antioxidante único (AU) ácido graso omega 3 (59 ciclos). C) antioxidantes combinados (AC) (71 ciclos). Total con antioxidantes, 130 ciclos A los varones con astenospermia idiopática leve se les indicó IAC y en los casos severos, se realizó ICSI. La duración media del tratamiento antioxidante osciló entre 120 y 135 días en todos los grupos. Las dosis fueron las indicadas por el laboratorio. La duración total de estudio fue de 3 años. Resultados: A) En astenospermia idiopática leve que precisa de IAC. Se observó una mejoría significativa en la movilidad progresiva espermática, en todos los grupos. Al comparar AU con AC, la movilidad fue superior con AC, pero no significativo (NS). La tasa de embarazo bioquímico fue significativamente superior con AC, así como las tasas de embarazo clínico y de recién nacido vivo sano (RNVS), pero estas no fueron significativas (NS). Observamos una elevada tasa de aborto en el grupo de AC, aunque NS. B) En astenospermia idiopática severa que precisa de ICSI. Se observó también una mejoría significativa en la movilidad en todos los grupos. Al comparar AU con AC, la movilidad fue superior con AC, aunque NS. La tasa de embarazo bioquímico fue significativamente superior tanto con AU como con AC, comparando con el grupo control. La tasa de embarazo clínico y de RNVS fueron superiores con AU, pero NS, debido a la elevada tasa de aborto observada con AC. Conclusiones: 1. La tasa de recién nacido vivo sano aumenta con la toma de antioxidantes tanto único como combinados comparado con los controles, sin embargo, este aumento no es significativo. 2. La tasa de embarazo bioquímico aumenta significativamente con la toma de antioxidantes tanto único como como combinados comparado con los controles tanto en astenospermia leve (IAC) como severa (ICSI). 3. No se puede concluir nada significativo respecto a las modificaciones en la concentración y en la motilidad progresiva espermática después de la toma de antioxidantes en varones con astenospermia leve ni en los casos severos. Únicamente observamos un aumento importante de la movilidad tras tratamiento, sobre todo con antioxidantes combinados. 4. Se observa una elevada tasa de aborto únicamente en embarazos conseguidos con antioxidantes combinados, en todos los casos de astenospermia idiopática, tanto en IAC como en ICSI, pero este hallazgo no ha sido significativo. Objectives: Assessing whether oral antioxidants administered subfertile men with idiopathic astenospermia are effective in improving semen parameters and pregnancy rates after performing Assisted Reproduction Techniques (ART) or IAC or ICSI. - Primary outcomes: Assessment of clinical parameters: rate of newborn healthy living (NWR), born feasible, clinical and biochemical pregnancy. - Secondary outcomes: Assessment of laboratory parameters: oocyte and embryo. Assessment treatment and pregnancy (micarriage rate) side-effects. Methodology: Clinical study in 179 infertile couples indicating TRA (IAC or ICSI), only the male cause: mild to severe idiopathic astenospermia. 162 ICSI and 97 of IAC: 259 ART cycles were performed. Open, prospective, randomized, double-blind, single-center clinical trial. Three study groups are analyzed: A) no treatment control or male (129 cycles). B) only antioxidant (AU) omega 3 fatty acid (59 cycles). C) antioxidants combined (AC) (71 cycles). Total antioxidant, 130 cycles. A men with mild idiopathic astenospermia were instructed IAC and in severe cases, ICSI was performed. The average duration of antioxidant treatment ranged between 120 and 135 days in all groups. The doses were as indicated by the laboratory. The total duration of the study was 3 years. Results: A) In mild idiopathic astenospermia that requires IAC. A significant improvement in sperm progressive motility in all groups was observed. AU comparing with AC, mobility was higher with AC, but not significant (NS). Biochemical pregnancy rate was significantly higher with AC and clinical pregnancy rates and live healthy newborn (NWR), but these were not significant (NS). We observed a high rate of abortion in the AC, but NS. B) In severe idiopathic astenospermia that requires ICSI. A significant improvement in mobility in all groups was also observed. AU comparing with AC, mobility was higher with AC, although NS. Biochemical pregnancy rate was significantly higher both as AC AU, compared to the control group. The clinical pregnancy rate and NWR were higher with AU, but NS, due to the high rate of abortion observed with AC. Conclusions: 1. Live healthy newborn rate increases with intake of antioxidants both unique and combined compared with controls, however, this increase is not significant. 2. The rate of biochemical pregnancy increases significantly with taking antioxidants combined both unique and as compared with controls both mild astenospermia (IAC) and severe (ICSI). 3. There can be no conclusion regarding significant changes in sperm concentration and progressive motility after taking antioxidants in men with mild astenospermia or in severe cases. Only observed a significant increase in mobility after treatment, especially combined with antioxidants. 4. A high rate of abortion is observed only in pregnancies achieved with combined antioxidant in all cases of idiopathic asthenospermia, both IAC and ICSI, but this finding has not been significant.
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    Estudio de los determinantes de calidad seminal en pacientes que acuden a un servicio de reproducción asistida
    (2016-06-02) Melgarejo Melgarejo, María Encarnación; Tovar Zapata, Isabel; Mendiola Olivares, Jaime; Torres Cantero, Alberto Manuel; Facultad de Medicina
    OBJETIVOS El objetivo general de este trabajo es profundizar en el estudio de la fertilidad masculina, abordando el problema desde la perspectiva de posibles factores ambientales y hábitos de vida que pudieran alterar la calidad seminal y los niveles de hormonas reproductivas. 1. Analizar la asociación entre los niveles ambientales de pesticidas organofosforados, medidos por sus metabolitos urinarios, los dialquilfosfatos (DAP) y su relación con los parámetros reproductivos (calidad seminal y niveles hormonales) en varones que acuden a un servicio de infertilidad. 2. Evaluar la correlación entre los biomarcadores de estrés oxidativo (oxido nítrico y malondialdehído), y la capacidad antioxidante total (TAC), ambos medidos en suero y en semen, y sus asociaciones con parámetros reproductivos. 3. Examinar asociaciones entre las dos medidas de distancia anogenital (DAG) y la calidad seminal y su uso como un posible biomarcador clínico de la capacidad reproductiva en varones. METODOLOGÍA Población de estudio: El estudio se llevó a cabo en varones de entre 25 y 38 años, procendentes de la consulta de esterilidad del Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. De los 220 pacientes a los que se les invitó a participar en el estudio 162 aceptaron. De ellos 141 volvieron para un análisis de semen, 122 accedieron a realizarse un análisis sanguíneo, 119 fueron capaces de obtener una muestra de orina, 116 devolvieron los cuestionarios cumplimentados y solo 91 accedieron a realizarse un examen físico. Espermiograma: Se analizaron la concentración espermática, el porcentaje de espermatozoides móviles y se realizó un análisis morfológico. Además se calcularon el recuento total y el recuento de espermatozoides móviles. Las horas de abstinencia fueron calculadas para posteriores análisis. Examen físico: El peso corporal y la altura fueron medidos y se calculó el índice de masa corporal (IMC). Además se midieron las dos distancias anogenitales por duplicado. La distancia genital alargada (DAGap) que comprende desde la inserción del pene hasta el centro del ano, y la distancia genital acortada (DAGAS), medida desde la base posterior del escroto hasta el centro del ano. Análisis hormonal: Se determinaron las concentraciones serológicas de las siguientes hormonas: Testosterona (T), estradiol (E2), prolactina (PRL), hormona folículo estimulante (FSH) y hormona luteinizante (LH). Plaguicidas Organofosforados: Las muestras de orina fueron enviadas para su análisis al Instituto de Prevención y Medicina Ocupacional de Alemania. Allí se determinaron los seis metabolitos urinarios de los organosfosforados, los dialquilfosfatos: dimetilfosfato (DMP), dimetiltiofosfato (DMTP), dimetilditiofosfato (DMTP), dietilfosfato (DEP), dietiltiofosfato (DETP) y dietilditiofosfato (DEDTP). Estrés oxidativo: Se analizaron las concentración de oxido nítrico (ON) en plasma seminal, y las de malondialdehído (MDA) y capacidad antioxidante total (TAC) tanto en suero como en plasma seminal. RESULTADOS Y CONCLUSIONES 1. La exposición ambiental a pesticidas organofosforados se asoció con una disminución del recuento de espermatozoides y su movilidad. Nuestro estudio también sugiere que estos compuestos podrían actuar como disruptores endocrinos, alterando la función hormonal de los varones potencialmente infértiles. 2. Encontramos una correlación significativamente positiva entre los marcadores bioquímicos de estrés oxidativo y la disminución del recuento espermático, la movilidad y el porcentaje de morfología normal. Además, el estrés oxidativo estaría relacionado con la alteración de los niveles de hormonas reproductivas en varones potencialmente infértiles, aunque son necesarios más estudios para confirmar estos hallazgos. 3. Una DAGAS acortada se asoció con una disminución en la concentración espermática, recuento total, y el recuento de móviles totales en estos varones. La DAG podría resultar de interés como posible biomarcador clínico de la capacidad reproductiva en varones, aunque son necesarios más estudios para corroborar estos resultados. OBJETIVES The overall aim of this work is to deepen the study of male fertility, approaching the problem from the perspective of possible environmental factors and lifestyle habits that could affect semen quality and levels of reproductive hormones. 1. To analyze the association between enviromentals levels of organophosphate pesticides, measured by their urinary metabolites, dialkyl (DAP) and its relationship to reproductive parameters (semen quality and hormone levels) in men attending infertility services. 2. To evaluate the correlation between biomarkers of oxidative stress (malondialdehyde and nitric oxide), and total antioxidant capacity (TAC), both measured in serum and semen, and their associations with reproductive parameters. 3. To examine associations between the two measures of anogenital distance (DAG) and semen quality and its use as a potential biomarker of clinical reproductive capacity in man. METHODOLOGY Study population This study was carried out in men attending infertility services of the “Virgen de la Arrixaca” University Hospital in the Murcia Region (Southern Spain), 25-38 years old.Of the 220 men who were offered participation in the study, 162 accepted. Of these, 141 returned for semen analysis, 122 agreed to have a blood drawn, 119 were able to obtain a urine sample, 116 delivered the completed questionnaires and 91 returned the agreed day for physical examination Semen Analysis: Sperm concentration, the percentage of motile sperm and morphological analysis were determined. In addition the total count and motile sperm count were calculated. Time of abstinence (hours) were calculated for further analysis. Physical examination: Body weight and height were measured and body mass index (BMI) was calculated. Besides the two anogenital distances were assesed in duplicate. The longer anogenital distance, AGDAP,was measured from the cephalad insertion of the penis to the center of the anus. The shorter anogenital distance, AGDAS, was measured from the posterior base (first fold) of the scrotum to the center of the anus. Hormone analysis: Serological concentrations of the following hormones were determined: Testosterone (T), Estradiol (E2), Prolactin (PRL), Follicle Stimulating Hormone (FSH) and Luteinizing Hormone (LH). Organophosphate pesticides: Urine samples were analyzed in Institute for Prevention and Occupational Medicine of the German Social Accident Insurance (Germany). Six urinary metabolites of organophosphate, dialkylphosphates, were determined: dimethylphosphate (DMP), dimethylthiophosphate (DMTP), dimethyldithiophosphate (DMTP), diethylphosphate (DEP), diethylthiophosphate (DETP) and diethyldithiophosphate (DEDTP). Oxidative stress: The concentration of nitric oxide (ON) were analyzed in seminal plasma, and malondialdehyde (MDA) and total antioxidant capacity (TAC) in both serum and seminal plasma. RESULTS AND CONCLUSIONS 1. The environmental exposure to organophosphate pesticides is associated with decreased sperm count and mobility. Our study also suggests that these compounds could act as endocrine disruptors, altering hormone function of potentially infertile men. 2. We found a significant positive correlation between biomarkers of oxidative stress and decreased sperm count, mobility and the percentage of normal morphology. In addition, oxidative stress would be correlated to altered levels of reproductive hormones in potentially infertile men, although further studies are needed to confirm these findings. 3. The shortened DAG was associated with a decrease in sperm concentration, total counts and total motile counts in these men. The DAG could be of interest as a potential biomarker of clinical reproductive capacity in males, although further studies are needed to confirm these results.
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    Expresión proteómica del plasma seminal del toro criollo San Martinero y su relación con la fertilidad y desarrollo embrionario in vitro en condiciones del trópico bajo colombiano.
    (2013-10-09) Barajas Pardo, Diana Patricia; Coy Fuster, Pilar; Facultad de Veterinaria
    La producción animal en un país tropical como Colombia se ve limitada, entre otras cosas, por factores ambientales adversos, como temperatura, humedad relativa y radiación solar altas a lo largo del año. En los sistemas de producción bovina colombiana existen razas criollas, como la San Martinero, que ha demostrado los mejores índices reproductivos (fertilidad, natalidad, intervalo entre partos, etc.). Para esclarecer el porqué de la mayor fertilidad, la presente investigación se realiza con el propósito de estudiar proteínas del plasma seminal y su asociación con indicadores de calidad espermática pre- (volumen seminal, concentración, motilidad, viabilidad, morfología, índice de calidad espermática (ICE) y espermatozoides congelables) y post-descongelación (motilidad, viabilidad, morfología e ICE), fertilidad y producción in vitro de blastocistos de esta raza criolla en la época lluviosa comparada con la época seca y con la raza Cebú Brahman. Para la investigación se seleccionaron al azar 7 toros reproductores de la raza San Martinero (SM) y 7 de la raza Cebú Brahman. Los ejemplares se mantuvieron bajo pastoreo en Brachiaria decumbens en el Centro de Investigaciones la Libertad de Corpoica. La evaluación por época se realizó en SM tanto en período lluvioso como de sequía y la evaluación entre razas (SM y Cebú) únicamente se realizó en lluvias. Los muestreos y análisis seminales por toro en fresco se realizaron tres veces y post descongelación 5 veces para evaluación de calidad espermática, fecundación y producción in vitro de blastocistos. El análisis de la información se basó en Modelos mixtos con medidas repetidas en el tiempo y en ecuaciones de predicción y análisis de componentes principales. Los resultados del estudio permitieron la generación de los primeros mapas referenciales uni y bidimensionales de la raza San Martinero y de la Cebú Brahman caracterizados bajo las condiciones climáticas del trópico bajo colombiano. Los resultados obtenidos de los toros SM para la época de lluvias en términos de indicadores de calidad espermática, fecundación in vitro y efecto en el desarrollo embrionario vistos en forma integrada permiten predecir la fertilidad in vivo. Los valores de estos indicadores no generaron grandes cambios entre la época seca o lluviosa, pero sí superaron a los indicadores de eficiencia reproductiva de toros reproductores de la raza Cebú Brahman. Los cambios de las variables estudiadas que determinan la calidad espermática de los toros por efecto de las proteínas plasmáticas son respuesta de la participación en forma de clúster que integra, bajo un modelo de predicción, proteínas con y sin cambios significativos y no en forma independiente. En este estudio reconocimos algunos modelos cuya asociación explican en gran forma el comportamiento de las variables de calidad seminal (volumen seminal, concentración, motilidad, viabilidad y morfología espermáticas), del ICE y de la producción de espermatozoides congelables, en función de la raza, la época climática, o de acuerdo a si se trata de semen fresco o descongelado. La investigación realizada permitió identificar que el punto de proteína A2301, de de peso molecular 16.74 kDa y pI 4.78, se asocia con los toros seleccionados como de mayor fertilidad, mientras que los puntos A4113 y A4119, de pesos moleculares 15.37 y 15.49 kDa y pI de 5.38 y 5.15, respectivamente, se relacionaron con los toros de baja fertilidad. Los resultados encontrados de la evaluación de calidad espermática del toro criollo SM y de participación de las proteínas del plasma seminal estudiados entre época y comparado con la raza Cebú Brahman muestran la superioridad del bovino Criollo y señalan a la proteómica como una gran herramienta para la selección de toros. Animal production in a tropical country like Colombia is constrained, among other things, by adverse environmental factors such as temperature, relative humidity and high solar radiation throughout the year. In cattle production systems Colombian landraces exists, such as San Martinero, which has shown the best reproductive rates (fertility, birth, calving interval, etc..). To clarify the reason for its increased fertility, this research was done with the purpose of studying seminal plasma proteins and their association with indicators of sperm quality pre- (volume, concentration, motility, viability, morphology, sperm quality index (ICE) and freezable sperm) and post-thaw (motility, viability, morphology and ICE), fertility and in vitro production of blastocysts in this race Creole during the rainy season compared to the dry season and to Zebu Brahman semen. Seven San Martinero (SM) bulls and 7 Zebu Brahman were randomly selected for the research. The specimens were kept under grazing with Brachiaria decumbens in the Research Center Corpoica “La Libertad”. The evaluation was conducted in SM both in the rainy and drought seasons and evaluation between races (SM and Zebu) only took place in the rainy season. Sampling and quality assessment for bull fresh semen were performed three times; for post-thaw sperm, fertilization and in vitro blastocyst production, the evaluations were 5 times repeated. The data analysis was based on mixed models with repeated measures over time and predictive equations and principal component analysis. The results of the study allowed the first generation and two-dimensional reference maps of seminal plasma proteins of San Martinero and Zebu Brahman races characterized under tropical climatic conditions in Colombia. The results of the SM bulls for the rainy season in terms of indicators of sperm quality, fertilization and in vitro embryo development, showed in an integrated way, let predict the in vivo fertility. The values of these indicators did not produce major changes between the dry and rainy season, but outscored the reproductive efficiency indicators of breeding bulls of Brahman Zebu. The changes of the studied variables that determine the sperm quality of the bulls by the effect of the plasma proteins are the response for their participation in a cluster manner and not in an independently manner, that integrates, under a prediction model, proteins with and without significant changes. In this study, some models were recognized whose association explains the behavior of variables that account for semen quality (seminal volume, concentration, motility, viability and sperm morphology), SQI and sperm production, depending on the race, the climatic season, or according to whether it was fresh or frozen-thawed sperm. The investigation identified the protein point A2301, with molecular weight of 16.74 kDa and pI 4.78, associated with bulls selected as those with higher fertility, while points A4113 and A4119, with molecular weight 15.49 15.37 kDa and pI 5.38 and 5.15, respectively, were associated with low fertility bulls. The results of the evaluation of native SM bull sperm quality and participation of seminal plasma proteins studied between seasons, and compared with Zebu Brahman cattle, show the superiority of San Martinero and point to proteomics as a great tool for selecting of bulls.
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    Factores de origen femenino y masculino relacionados con la fertilidad humana y su aplicación en clínicas de reproducción asistida : proteínas del fluido folicular y genes de compactación del ADN espermático
    (Universidad de Murcia, 2023-11-06) Puga Torres, Daysi Tatiana; Romar Andrés, Raquel; Cánovas Bernabé, Sebastián; Escuela Internacional de Doctorado
    La infertilidad afecta alrededor del 15% de parejas en edad reproductiva. Su prevalencia se considera similar entre países desarrollados y países en vías de desarrollo; no obstante, está en aumento a nivel mundial por diversos factores clínicos y de hábitos sociales como la obesidad, enfermedades de transmisión sexual, e incluso por postergar la edad para concebir. La infertilidad se ha abordado considerando su origen como femenino o masculino, aunque existe un porcentaje importante de casos definidos como idiopáticos, por lo que existe un interés creciente en el diagnóstico adecuado de la pareja infértil. Dentro del manejo de la infertilidad femenina, muchas mujeres requieren tratamientos de fecundación in vitro (FIV) para lograr un embarazo a término con un niño/a nacido vivo. En una FIV, la recuperación de complejos cúmulus-ovocito (COCs) competentes es importante. Considerando que en esta competencia influye de manera decisiva la contribución de las células del cúmulus y el fluido folicular (FF), el estudio de la composición de este biofluido y su relación con la infertilidad es relevante. De hecho, la oscilación de las concentraciones de proteínas totales del FF podría afectar a la competencia del ovocito; así mismo, los niveles de especies reactivas de nitrógeno (RNS) permitirían evaluar el daño oxidativo de las proteínas presentes en el fluido folicular humano (FFH). Por otro lado, en la infertilidad masculina, entre el 30 y 72% de los casos aún son diagnosticados como idiopáticos, por lo que se han desarrollado pruebas diagnósticas más completas que permiten evaluar factores moleculares y genéticos como posibles causas de la infertilidad. Sin embargo, estas pruebas no son de uso rutinario en la práctica clínica. Entre las causas genéticas estudiadas en relación con la fertilidad masculina se encuentran los polimorfismos en los genes involucrados en la compactación del ADN: PRM1, PRM2, TNP1 y TNP2. También, la expresión de estos genes (ARN) y el estado de protaminación del ADN son de interés en el estudio de la infertilidad masculina. Considerando lo expuesto, y tras una exhaustiva revisión bibliográfica expuesta en el capítulo I, este trabajo pretende abordar el estudio de la infertilidad desde su vertiente femenina y masculina para identificar biomarcadores sencillos y no invasivos que puedan ser utilizados como predictivos del éxito de los tratamientos de fertilidad en la clínica rutinaria y, de este modo, mejorar la eficiencia en los ciclos de reproducción asistida. En el capítulo II se estudió en el FFH, la concentración de proteínas totales (PT), albúmina y globulinas, así como los niveles de proteínas modificadas con nitrotirosina para valorar el grado de estrés oxidativo de este biofluido y su relación con la posterior calidad ovocitaria y embrionaria. Para ello, el FFH de 74 mujeres sometidas a tratamiento de inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) (41 grupo control y 33 mujeres infértiles con diferentes diagnósticos) fue recuperado tras la aspiración folicular y recuperación de los complejos cúmulus-ovocito (COCs). El FFH se centrifugó, filtró y almacenó a -20ºC hasta su análisis. La concentración de PT, albúmina y globulinas se determinó mediante la plataforma analítica COBAS c501 utilizando el método de fotometría automatizada - test colorimétrico, mientras que la medición del nivel de proteínas modificadas con nitrotirosina se analizó mediante el test ELISA 3-nitrotirosina (3-NT). Los resultados mostraron una distribución homogénea de las concentraciones de PT, albúmina y globulinas en el grupo control, mientras que en el grupo infértil se observó una gran variabilidad en esta distribución entre los diferentes diagnósticos de las pacientes. El grupo control alcanzó mayores concentraciones proteicas que el grupo infértil: PT (4.92±0.09 g/dl vs. 4.45±0.12 g/dl), albúmina (1.84±0.06 g/dl vs. 1.66±0.04 g/dl) y globulinas (3.08±0.05 g/dl vs. 2.79±0.09 g/dl). Las mujeres con endometriosis e insuficiencia ovárica tuvieron menores concentraciones de PT y albúmina que las mujeres con otros diagnósticos de infertilidad. Por otro lado, no se encontró diferencia en las concentraciones de 3-NT entre el grupo control (28.40±1.79 ng/ml) vs. infértiles (26.83±2.20 ng/ml) ni hubo diferencias dentro del grupo de mujeres infértiles en base a sus diagnósticos. En el capítulo III se estudiaron los polimorfismos en los genes TNP1, TNP2, PRM1 y PRM2 en hombres mestizo ecuatorianos fértiles e infértiles. Para esto se incluyeron 144 hombres (43 control y 101 grupo infértil) a los que se les realizó un espermiograma y una toma de muestra de sangre periférica. Se realizó extracción de ADN en la sangre periférica, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y secuenciación de estos genes. Se identificaron nueve polimorfismos ninguno de los cuales mostraron relación con la fertilidad y no serían factor de riesgo de infertilidad en el varón. Los polimorfismos identificados fueron rs62180545 en TNP1, rs11640138 y rs56069754 en TNP2, rs201923496 y rs737008 en PRM1, rs749752404, rs1646022, rs2070923 y rs182114260 en PRM2. De este grupo, los únicos polimorfismos no descritos previamente en otras poblaciones fueron rs749752404 y rs182114260, ambos en PRM2. En el capítulo IV se estudió los niveles de protaminación/empaquetamiento de la cromatina y expresión de PRM1 y PRM2 (ARN) en espermatozoides de hombres fértiles e infértiles. Para ello se incluyeron 131 individuos (35 grupo control y 96 pacientes infértiles), a los que se les realizó un análisis de semen. La muestra seminal fue sometida a la técnica de selección espermática swim up y dividida en alícuotas en tubos de criopreservación y almacenadas a -196°C hasta su posterior procesamiento. La evaluación indirecta del empaquetamiento de la cromatina en espermatozoides se realizó mediante el ensayo de cromomicina A3 (CMA3), mientras que para la evaluación de la expresión de los genes PRM1 y PRM2, se realizó extracción de ARN, cDNA y PCR en tiempo real con el reactivo Power SYBR® Green PCR Máster Mix. El gen BETA-ACTINA (BA) fue considerado como gen de referencia. En los resultados se observó mayor porcentaje de espermatozoides con CMA3 en el grupo infértil vs. grupo control (15.37±1.00 vs. 12.10 ±1.01, P=0.01). Dentro del grupo control los niveles de CMA3 estuvieron aumentados en individuos con sobrepeso y obesidad tipo I frente al peso normal, llegando estos niveles a ser igual de elevados que los del grupo infértil. También dentro del grupo control, los individuos con varicocele que se sometieron a operación presentaron menores niveles de CMA3 comparados con los individuos no operados. Por otro lado, al evaluar los niveles medios de expresión (ΔCT) de PRM1 y PRM2, así como el ratio PRM1/PRM2, no se encontraron diferencias entre ambos grupos de estudio. Al evaluar la influencia del índice de masa corporal en los resultados, sólo se encontraron diferencias en el ratio PRM1/PRM2 de pacientes infértiles entre individuos con peso normal vs. sobrepeso (P=0.001). Los resultados de este trabajo sugieren que la concentración de proteínas totales del FFH podría ser considerado como marcador dentro del tratamiento de reproducción asistida; y el análisis del estado de protaminación (CMA3) permitiría una identificación de posible causa de infertilidad en hombres catalogados con infertilidad idiopática.
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    Factores pronósticos en FIV
    (Universidad de Murcia, 2019-10-22) Gálvez Pradillo, Jorge; Nieto Díaz, Aníbal; Álvarez Castillo, Jesús; Escuela Internacional de Doctorado
    En el presente trabajo se han valorado diferentes parámetros o variables de pacientes con esterilidad primaria sometidas a fecundación in vitro (FIV) con transferencia embrionaria en fresco, para determinar su influencia y significación estadística, en el resultado de las técnicas de reproducción asistida (TRA), más concretamente con la consecución de la gestación clínica y evolutiva, cómo paso previo a la obtención de un niño en casa, idealmente único y sano. Las diferentes variables analizadas se han distribuido en tres grupos. El primero de ellos incluye las características basales de las pacientes sometidas a FIV, determinadas previamente a la estimulación ovárica controlada (EOC) : edad, índice de masa corporal (IMC), FSH ( hormona folículo estimulante) basal y estradiol basal. En este punto, nuestros datos confirman que tanto la edad como el IMC tienen una influencia estadísticamente significativa con la tasa de gestación, de modo inverso, a mayor edad y mayor IMC menor es la probabilidad de gestación. En segundo lugar, desarrollamos las características del propio ciclo de estimulación ovárica y técnica de laboratorio: técnica de inseminación ovocitaria empleada en el laboratorio FIV, tipo de gonadotropina utilizada para la estimulación ovárica, tipo de protocolo de estimulación ovárica usado y clínica concertada donde se lleva a cabo la finalización de la estimulación ovárica, maduración y recuperación ovocitaria , fertilización, control de desarrollo embrionario y transferencia embrionaria en fresco. Así como las tres primeras características de este grupo de variables, no tienen influencia significativa en la tasa de gestación, en la variable clínica concertada nuestros datos demuestran la gran importancia que tiene el laboratorio FIV en todo proceso de reproducción asistida, alrededor del cual gira el éxito o fracaso del procedimiento de la fecundación in vitro, hasta el punto que los fallos o incidencias en el mismo afectan negativamente a los resultados perseguidos en toda técnica de reproducción asistida. En el tercer grupo de variables, definidas tras la recuperación ovocitaria, analizamos diversos parámetros del ciclo FIV pospunción: número de ovocitos totales recuperados, número de ovocitos maduros metafase II ( MII), número de ovocitos fecundados (cigotos), número de embriones criopreservados sobrantes, número de embriones transferidos y día de la transferencia embrionaria. En este punto, nuestros datos refieren la gran importancia de conseguir un número óptimo de ovocitos maduros de calidad para el éxito de la FIV, que podemos establecer a partir de los 10 ovocitos y sin sobrepasar los 19 ovocitos, todo ello encaminado a lograr la gestación sin el debe de las complicaciones inherentes a los altos niveles estrogénicos, como es el cuadro de hiperestimulación ovárica (HSO) así como la afectación en la calidad embrionaria o/y endometrial que disminuirían la posibilidad de gestación tras la transferencia embrionaria en fresco. Las diferentes variables, tanto cuantitativas como cualitativas, se han sometido a un estudio estadístico descriptivo determinando su significación estadística en relación a la tasa de gestación. La relación entre variables cuantitativas se ha analizado con los coeficientes de correlación lineal de Pearson. La asociación entre variables cualitativas se ha hecho mediante el análisis de tablas de contingencia con el test de la X2 de Pearson complementado con el análisis de residuos para determinar la tendencia a la asociación. A partir de los datos estadísticos, hemos establecido la comparativa con los estudios publicados definiendo en último lugar las conclusiones respecto a la hipótesis planteada. En resumen, el objetivo de este trabajo, realizado con la finalidad de obtener el título de Doctor en Medicina en la especialidad de Obstetricia y Ginecología, ha sido valorar qué características basales de las pacientes, del ciclo de estimulación ovárica y del desarrollo del ciclo FIV pospunción pueden predecir la finalidad de toda TRA que es el de lograr un niño en casa, cuyo primer paso es obtener una B-hCG positiva.
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    Las imagenes de la fertilidad del campo castellano en los siglos XVIII y XIX
    (Murcia : Cátedra de Historia Contemporánea, Universidad de Murcia, 2000) Serrano García, Rafael
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    Optimizando el manejo agroecológico de plagas a través de la salud del suelo
    (Servicio de Publicaciones - Universidad de Murcia, 2006) Altieri, Miguel A.; Nicholls, Clara I.
    Métodos culturales de manejo de suelos tales como la fertilización afectan la susceptibilidad de plantas al ataque de insectos plaga vía alteraciones de los niveles de nutrientes en los tejidos. Investigaciones revelan que la habilidad de una planta a tolerar la incidencia de plagas o enfermedades está ligada a las condiciones óptimas del suelo, en particular las propiedades biológicas. Cultivos que crecen en suelos con un alto contenido de materia orgánica y con alta actividad biólogica exhiben por lo general menor incidencia de plagas. Estas reducciones parecen atribuirse a niveles menores de nitratos libres en el follaje. Por el contrario, prácticas agrícolas como el uso excesivo de fertilizantes que crean imbalances nutricionales tienden a reducir la defensa de las plantas. Hay varios estudios comparativos que reportan menor incidencia en cultivos orgánicos que aquellos en sistemas convencionales. Entender los mecanismos claves que explican porque la fertilización orgánica parece mejorar la salud de los cultivos, es una área activa de investigación que puede conllevar a mejorar los diseños agroecológicos al permitir armonizar el manejo de suelos y el manejo de plagas.