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    Follicle-stimulating hormone promotes nerve growth factor and vascular endothelial growth factor expression in epithelial ovarian cells
    (Universidad de Murcia, Departamento de Biologia Celular e Histiologia, 2020) Garrido, Maritza P.; Bruneau, Nicole; Vega, Margarita; Selman, Alberto; Tapia, Julio C.; Romero, Carmen
    Ovarian cancer is the first cause of death for gynecological malignances in developed countries and around 80% correspond to Epithelial Ovarian Cancer (EOC). Overexpression of Nerve Growth Factor (NGF) and its high affinity receptor TRKA are involved in EOC progression, modulating several oncogenic processes such as angiogenesis by the increase of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF). FSH receptors (FSH-R) are present in EOC, but their changes and contribution during EOC progression are still not thoroughly known. The aims of this study were to evaluate the abundance of FSH receptors during EOC differentiation and to determine whether FSH modulates oncoproteins such as NGF and VEGF in ovarian cells. FSH-R expression in EOC tissues and cell lines (A2780, poorly differentiated EOC cells and HOSE, non-tumoral ovarian surface epithelial cells) were measured by RT- PCR and laser capture of epithelial cells from EOC samples by qPCR. FSH-R protein levels were evaluated by immunohisto/cytochemistry. Additionally, ovarian explants and ovarian cell lines were stimulated with FSH and/or FSH-R inhibitor to assess NGF and VEGF mRNA and protein levels. The results showed that FSH-R levels decreased during loss of EOC cell differentiation, nevertheless these receptors are still present in poorly differentiated EOC. FSH increased NGF expression in ovarian cells, which was prevented using a FSH-R inhibitor. Similarly, in ovarian cancer explants, FSH increased NGF and VEGF mRNA, as well as NGF protein levels. These results suggest that FSH would display a key role not only in initial stages of EOC, but also in late stages of this disease, by modulation of NGF and VEGF levels in EOC cells
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    Influence of BMP-2 on early follicular development and mRNA expression of oocyte specific genes in bovine preantral follicles cultured in vitro
    (Universidad de Murcia. Departamento de Biología Celular e Histología, 2016) Ross, Rodrigo O.D.S.; da Cunha, Ellen V.; Portela, Antonia M.L.R.; Passos, José R.S.; Costa, José J.N.; Silva, Anderson W.B.; Saraiva, Márcia V.A.; Peixoto, Christina A.; Donato, Mariana A.M.; van den Hur, Robert k; Silva, José R.V.
    This study evaluates the effect of different concentrations (0, 10, 50 and 100ng/mL) of bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) on primordial and secondary follicle development. It also investigates the effects of FSH and BMP-2 on the growth, morphology, ultrastructure and expression of mRNA for GDF9, NLRP5 and NPM2 genes in secondary follicles cultured for 18 days. The presence of BMP-2 at all tested concentrations increased the development of primordial follicles in vitro, but the highest concentration of BMP-2 (100 ng/mL) reduced the percentage of normal follicles when compared with tissues cultured with 10 ng/mL BMP-2. During culture of secondary follicles, in contrast to higher concentrations (50 or 100 ng/mL), 10 ng/mL BMP-2 kept the morphology of follicles during initial stages of in vitro culture. This concentration of BMP-2 also benefits maintenance of the ultrastructure of 18-day cultured follicles. The presence of both BMP-2 and FSH in culture medium resulted in a significant (P<0.05) increase in follicular diameter after 18 days of culture. However, both FSH and BMP-2 reduced follicular mRNA expression of GDF9 and NLRP5 when compared to follicles cultured in media containing only FSH. In combination with FSH, BMP-2 reduced the mRNA levels of NPM2, when compared to follicles cultured in control medium. It is concluded from these data that 10 ng/mL BMP-2 promotes the growth of primordial in vitro and it helps to maintain the ultrastructure of secondary follicles, while FSH is more important for better expression of follicular markers like GDF9 and NLRP5.
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    Rendimiento de OPU en vacas de raza murciano-levantina: respuesta a la estimulación ovárica mediante FSHp (Pluset®)
    (2025-04) Metony, Océane; Heras García, Sonia; Ramal Barea, Ismael; Romero Aguirregomezcorta, Jon; Ruiz López, Salvador; Departamentos; Universidad de Murcia, Servicio de publicaciones.; Facultades,Servicios y Escuelas::Facultades de la UMU::Facultad de Veterinaria
    La técnica OPU (Ovum Pick-Up) permite obtener ovocitos de animales vivos para la fecundación (FIV) y producción in vitro de embriones (PIV). El objetivo del trabajo ha sido evaluar el rendimiento de la OPU en vacas de raza Murciano-Levantina (M-L), con el fin de recuperar ovocitos para la preservación de esta raza en peligro de extinción. Se seleccionaron 2 vacas M-L, Madroña y Unicornio, de 13 y 6 años, respectivamente, que fueron someti-das a un protocolo de estimulación hormonal con FSHp (Pluset®) durante 4 semanas, con un total de 4 sesiones de OPU/animal. Los ovocitos recuperados fueron cuantificados y clasificados en 5 grados (I a IV y degenera-dos) según su calidad ovocitaria. Los ovocitos viables (grados I a III) fueron vitrificados o madurados in vitro para posterior FIV y PIV. Se obtuvieron un total de 108 ovocitos, 34,26% de Madroña y 65,74% de Unicornio, de los cuales 92 (85,18%) fueron viables. El número medio de ovocitos totales (p = 0,03) y viables (p = 0,02) fue superior en Unicornio comparado con Madroña. Se obtuvieron significativamente más ovocitos grados I (p = 0,04) y III (p = 0,03) de Unicornio que de Madroña, y no se encontraron diferencias significativas para ovocitos grado II, IV y degenerados. En Madroña, el mayor número de ovocitos obtenidos fue grado III, con diferencias significativas (p = 0,03) entre este grupo y ovocitos grado I, IV y degenerados. En Unicornio, el mayor número de ovocitos fue grado III, con diferencias significativas (p = 0,02; p = 0,03), entre éste y ovocitos grado IV y degenerados. Este estudio demuestra que la OPU puede aplicarse con éxito en vacas M-L. Los resultados obtenidos muestran que existe variabilidad entre donantes en el número y calidad de ovocitos recuperados. Resultaría conveniente optimizar los protocolos de conservación genética en esta raza.
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    Respuesta a la estimulación ovárica mediante FSH (Folltropin®) y rendimiento de OPU en vacas adultas obtenidas por diferentes técnicas de reproducción asistida
    Morera-Jiménez, Alba; Velasco-García, Elena; Heras, Sonia; Romero-Aguirregomezcorta, Jon; Ruiz, Salvador; Dpto. Fisiología. Facultad de Veterinaria, Complejo Espinardo. 30100. Universidad de Murcia. Murcia. España.
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    Respuesta a la estimulación ovárica mediante FSH (folltropin®) y rendimiento de opu en vacas adultas obtenidas por diferentes técnicas de reproducción asistida
    (Universidad de Murcia. Servicio de publicaciones, 2022-11-15) Morera Jiménez, Alba; Velasco García, Elena; Romero Aguirregomezcorta, Jon; Ruiz López, Salvador; Anatomía y Anatomía Patológica Comparadas
    Los objetivos de este trabajo han sido realizar un seguimiento ecográfico de los ovarios bovinos para comprobar la respuesta folicular de vacas adultas nacidas por diferentes técnicas de reproducción asistida (TRA), tras aplicar un protocolo de estimulación ovárica con FSH (Folltropin®); y determinar la eficacia reproductiva de los animales estudiados, analizando la cantidad y calidad de los ovocitos obtenidos por aspiración folicular (Ovum Pick-Up, OPU) antes y después del protocolo de estimulación empleado. La experiencia se ha llevado a cabo en las instalaciones del santuario bovino de la Granja Docente Veterinaria de la Universidad de Murcia. Se han utilizado 4 hembras bovinas obtenidas por distintas TRA: inseminación artificial (IA), transferencia de embriones (TE) producidos por TRA con ovocitos cultivados in vitro en medios convencionales y por TE obtenidos por TRA con ovocitos cultivados con fluidos naturales (folicular y oviductal).Los animales fueron estimulados durante 5 semanas mediante un protocolo que consistía en la aplicación de GnRH y posteriormente, FSH (Folltropin®, 350 UI/animal) durante 3 días en dosis decrecientes. Una vez a la semana, al finalizar el protocolo de estimulación ovárica, se realizaba una ecografía de los ovarios y una aspiración folicular ecoguiada (OPU) para comprobar la respuesta al protocolo de estimulación y determinar el número de folículos y de ovocitos obtenidos tras la OPU y su calidad ovocitaria. Previamente al periodo de estimulación con FSH, las vacas fueron ecografiadas y sometidas a OPU 3 semanas sin estimulación ovárica como grupo control.A lo largo del trabajo realizado, se ha comprobado la respuesta al protocolo de estimulación ovárica ensa-yado, y se ha determinado la eficacia reproductiva de los animales, según el número de folículos aspirados y la cantidad y calidad de los ovocitos obtenidos por OPU en cada una de ellas.