Estudio de la expresión de VSTM1 en macrófagos humanos y su posible implicación en el desarrollo de cirrosis hepática

Abstract

RESUMEN Uno de los objetivos de este trabajo fue el estudio bibliográfico del gen VSTM1, que codifica un receptor inhibidor recientemente descrito en fagocitos. Para ello se revisó la bibliografía publicada en revistas de investigación científica, así como las secuencias depositadas en las principales bases de datos biológicos disponibles en la red hasta el momento. Los resultados encontrados revelaron que la información depositada en las bases de datos por los diferentes autores era redundante y presentaban una nomenclatura diferente. Tras estudios de alineamiento con diferentes herramientas informáticas, pudimos establecer las equivalencias entre los datos publicados. De las 6 isoformas descritas, generadas por maduración alternativa del ARN, sólo algunas secuencias coincidieron en las bases de datos consultadas. Además, se detectó un error en la notación de la secuencia ACU00108, ya que se tradujo en glicina un codón que codifica para serina. El siguiente objetivo fue el estudio de la expresión del gen VSTM1 mediante qRT-PCR en macrófagos peritoneales obtenidos del líquido ascítico de pacientes con cirrosis hepática, y su comparación con los obtenidos para macrófagos de sangre periférica de donantes sanos, como población de referencia. Esta patología se asociada a un incremento de mediadores inflamatorios y podría estar relacionada con la desregulación de algunos de los mecanismos de control del sistema inmunitario. La qRT-PCR realizada con los cebadores diseñados para estudiar las isoformas VSTM1-v1 y v2, reveló que éstas se expresan en ambas poblaciones de macrófagos, siendo mayores los niveles de expresión del transcrito que codifica la isoforma proteíca de membrana (v1) que la secretada (v2). Además, la expresión génica de VSTM1-v1 aumenta con la diferenciación del macrófago. Sin embargo, aunque se aprecia una tendencia hacia una menor expresión en la población de macrófagos de pacientes con cirrosis, estas diferencias no fueron estadísticamente significativas.

ABSTRACT One of the goals of this work was the bibliography study of the gene VSTM1, which encodes an inhibitory receptor recently described on phagocytes. To do this, we reviewed the bibliography from several scientific journals, as well as the sequences that so far now we can find in the main biological databases on the internet. Our results showed that the information available in the different databases was redundant and a different nomenclature was used for unique sequences. Using alignment studies with different bioinformatic tools we established equivalences between the published data. Taking into account the 6 isoforms described, generated by alternative splicing of the RNA, only some of them matched in the data bases revised. Furthermore, we detected a mistake in the sequence ACUU108, where a codon which encodes a serine was translated into glycine. Our next objective was to study the expression profile of the gene VSTM1, using qRT-PCR, on peritoneal macrophages obtained from ascitic fluid from patients with hepatic cirrhosis, and compared it with the expression on peripheral blood macrophages from healthy donors, which we used as a referential population. This pathology is related to an increase of inflammatory mediators that could be produced by a dysregulation of some control mechanisms involved in immune response. qRT-PCR performance using specific primers designed for VSTM1-v1 and v2, showed that these isoforms were expressed on both macrophage populations, and the level of expression was higher for the transcript which encodes the membrane protein (v1) than for the secreted one (v2). Moreover, we described that gene expression of VSTM1-v1 increases during macrophage differentiation. Nevertheless, although a tendency to a lower expression in cirrhotic macrophages was appreciated, this was not statistical significant.