Evaluación inmunológica en pacientes con fibromialgia Tipo 1

Abstract

OBJETIVOS. 1. Determinar el papel de los mecanismos autoinmunes en la patogenia de la fibromialgia. Evaluar la presencia de anticuerpos anti-serotonina, anticuerpos anti-gangliósidos y otros autoanticuerpos en sangre periférica de pacientes con fibromialgia y controles sanos así como analizar la variación de estos anticuerpos en función del estado clínico de los pacientes. 2. Evaluar la presencia de disbalances entre citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias y estudiar la asociación de los polimorfismos genéticos de estas citoquinas con la susceptibilidad y manifestaciones clínicas de la fibromialgia. 3. Analizar el polimorfismo de los genes KIR y HLA de clase I y clase II en pacientes con fibromialgia y controles sanos con el objetivo de conocer su posible asociación con la susceptibilidad y manifestaciones clínicas de la enfermedad. METODOLOGÍA Determinación de anticuerpos IgG e IgM anti-serotonina: ELISA tipo sándwich y anticuerpos anti-Gangliósidos mediante dot-blot. Los niveles de serotonina en suero se determinaron mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La determinación de citoquinas en suero se realizó con tecnología Luminex, con la excepción del TGF-β1 que se realizó mediante ensayo ELISA tipo sándwich. El polimorfismo de los genes de las citoquinas se determinó mediante un ensayo de discriminación alélica con sondas Taqman específicas. El estudio del polimorfismo VNTR del gen de la IL-4 se realizó PCR convencional empleando cebadores específicos para amplificar la región de interés El tipaje de los genes HLA-A, B, C, y KIR se realizó mediante las técnicas de PCR-SSO y PCR-SSP.

CONCLUSIONES: 1. Los niveles de serotonina se encuentran disminuidos en el suero de los pacientes con FM pero no parecen asociarse con la severidad de las manifestaciones clínicas. 2. La prevalencia de anticuerpos anti-serotonina IgG e IgM y los niveles séricos de estos anticuerpos se encuentran aumentados en pacientes con FM respecto a la población sana. 3. La prevalencia de anticuerpos anti-serotonina IgG e IgM es mayor en pacientes de FM con niveles de ansiedad moderada, severa o grave que en pacientes con niveles de ansiedad leve, lo que sugiere una asociación de estos anticuerpos con formas más severas de la enfermedad. 4. Los niveles séricos de las citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias estudiadas son similares en pacientes con FM y en la población sana. 5. Los SNPs de los genes de las citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias estudiadas no parecen asociarse con la susceptibilidad al desarrollo de FM. 6. El genotipo AA del SNP rs16944 del gen de la IL-1β se asocia con una manifestación grave o muy grave de la enfermedad según el test FIQ en pacientes con FM, por el contrario, la presencia del genotipo GA de este SNP se asocia con una manifestación más leve de la enfermedad. 7. El genotipo AA del SNP rs1143634 del gen de la IL-1β se asocia con una manifestación moderada o grave de la FM según el test CGI. 8. El genotipo 3R/3R de la región VNTR del gen de la IL-4 se asocia con una peor calidad de vida en pacientes con FM, por el contrario el genotipo 2R/3R se asocia a una mejor calidad de vida de los mismos. 9. El genotipo GG del SNP rs1800469 del gen del TGF-β se asocia a una mejor calidad de vida de los pacientes con FM, por el contrario el genotipo AG se asocia con niveles de ansiedad severa o grave en estos pacientes. 10. El polimorfismo de los genes KIR y HLA no se asocia con la susceptibilidad a desarrollar FM ni con las manifestaciones clínica de la misma. 11. Este trabajo confirma que la FM, además de estar condicionada por factores genéticos, desde el punto de vista inmunológico puede tener mecanismos etiopatogénicos diferentes como son los fenómenos autoinmunes o los fenómenos de desregulación de los mecanismos inflamatorios, hecho que puede tener relevancia clínica a la hora de evaluar adecuadamente a los pacientes así como para poder diseñar tratamientos más personalizados.

OBJECTIVES

1. Determine the role of autoimmune mechanisms in the pathogenesis of fibromyalgia. To evaluate the presence of anti-serotonin antibodies, anti-ganglioside antibodies and other autoantibodies in peripheral blood of patients with fibromyalgia and healthy controls, as well as to analyze the variation of these antibodies according to the clinical status of patients. 2. Evaluate the presence of imbalances between pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines and to study the association of cytokine genetic polymorphisms with the susceptibility and clinical manifestations of fibromyalgia. 3. To analyze the polymorphism of KIR and HLA class I and class II genes in fibromyalgia patients and healthy controls in order to investigate their potential association with the susceptibility and clinical manifestations of the disease.

METHODOLOGY The determination of anti-serotonin IgG and IgM antibodies was performed bysandwich ELISA, and the determination of anti-Ganglioside antibodies was performed by dot-blot. Serum levels of serotonin were determined by high performance liquid chromatography (HPLC). Serum cytokine determination was performed using Luminex technology, with the exception of TGF-β1 that was performed by sandwich ELISA. The cytokine gene polymorphisms were determined by allelic discrimination assay, with specific Taqman probes and alternatively by Sanger sequencing. The study of the IL-4 gene VNTR polymorphism was performed by conventional PCR using the specific primers to amplify the region of interest. Typing of the HLA-A, B , C, and KIR genes was performed using PCR-SSO and PCR-SSP techniques.

CONCLUSIONS: 1. Serotonin levels are decreased in the serum of FM patients but doesn´t appear to be associated with the severity of clinical manifestations. 2. The prevalence and serum levels of IgG and IgM anti-serotonin antibodies are increased in patients with FM compared to the healthy population. 3. The prevalence of IgG and IgM anti-serotonin antibodies is higher in FM patients with moderate or severe anxiety levels than in patients with mild anxiety levels, suggesting an association of these antibodies with more severe forms of the disease. 4. Serum levels of the studied pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines are similar in patients with FM and in healthy population. 5. SNPs of the studied pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokine genes doesn´t appear to be associated with susceptibility to FM development. 6. The AA genotype of the IL-1β gene SNP rs16944 is associated with a severe or very severe manifestation of the disease according to the FIQ test in patients with FM, by contrast, the presence of GA genotype in this SNP is associated with a milder manifestation of the disease. 7. The AA genotype of the IL-1β gene SNP rs1143634 is associated with a moderate or severe manifestation of FM according to the CGI test. 8. The 3R/3R genotype of the IL-4 gene VNTR region is associated with a worse quality of life in patients with FM., by contrast the 2R/3R genotype is associated with a better quality of life. 9. The GG genotype of the TGF-β gene SNP rs1800469 associated with a better quality of life in patients with FM, by contrast the AG genotype is associated with severe anxiety levels in these patients. 10. KIR and HLA genes polymorphism is not associated with the susceptibility and clinical manifestations of FM. 11. This work confirms that FM is conditioned by genetic factors, but also may be related to immunological factors such as autoimmune phenomena or a deregulation of inflammatory mechanisms, which may be relevant for an adequate clinical assessment of patients as well as for the design personalized treatments