Uso de agentes quelatantes inmovilizados en el análisis estructural y purificación de tirosinasa.

Abstract

Se ha analizado mediante isotermas de adsorción la naturaleza de la interacción de tirosinasa de epidermis de rana con el agente quelatante ácido etilendiaminotriacético inmovilizado en vidrio poroso (ED3A-CPG). La interacción es univalente y transcurre a través de centros polares independientes siguiendo isotermas del tipo de Langmuir. Las diferentes velocidades y capacidades de adsorción de cada una de las formas activa e inactiva de tirosinasa al soporte ED3A-CPG han conducido a confirmar que ;la enzima activada por tripsina posee un estado conformacional más desplegado que la proenzima. En base a los estudios de adsorción de la enzima en el soporte ED3A-CPG a diferentes fuerzas iónicas se deduce que el equilibrio de asociación-disociación de la forma activa de la tirosinasa está más desplazado hacia estados más agregados a fuerzas iónicas superiores a 0,1 M de lampón fosfato. El agente quelatante ED3A-0PG se puede utilizar como un soporte poroso de naturaleza intercambiador iónico para la purificación de tirosinasa, mediante la adsorción del enzima a bajas fuerzas iónicas y posterior elución de la misma por incremento de la fuerza iónica del medio.