Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10201/35629

Title: Monitorización inmunológica en transplante cardiaco.
Issue Date: 29-Jul-2013
Date of creation: 19-Jul-2013
Related subjects: 611 - Anatomía
616 - Patología. Medicina clínica. Oncología
Keywords: Corazón
Aparato cardiovascular
Abstract: El trasplante cardiaco es la principal opción terapéutica en insuficiencia cardiaca terminal. Sin embargo, la inmunosupresión utilizada para evitar el rechazo puede favorecer las infecciones y neoplasias. Por tanto, es necesario disponer de biomarcadores que permitan valorar el estatus inmunitario de cada paciente y así ajustar la terapia inmunosupresora a sus características y situación clínica. Objetivos: El objetivo general propuesto en esta memoria es monitorizar en sangre periférica biomarcadores que permitan evaluar el estatus inmunológico del paciente, antes y después del trasplante cardiaco, y su relación con la patología de base (cardiopatía isquémica y no-isquémica), la frecuencia del rechazo celular agudo, la severidad del rechazo crónico (evaluado mediante ultrasonido intravascular) y la frecuencia y el tipo de infecciones. De entre los objetivos específicos destacamos: 1) analizar y cuantificar las principales subpoblaciones leucocitarias (leucocitos, monocitos y neutrófilos) y linfocitarias (linfocitos T, B y NK), así como algunas moléculas relacionadas con su activación y función (CD80, CD86 y CD95); 2) evaluar la expresión de CD28 y la de receptores KIR (KIR2DL1/S1 y KIR2DL2/L3/S2) en linfocitos T CD4+ y CD8+, y compararla con la observada en los receptores de trasplante hepático de nuestro centro y 3) evaluar la concentración de HLA-G soluble en suero y su relación con las infecciones y la evolución de los injertos cardiacos a largo plazo. Metodología: En 77 trasplantes cardiacos se monitorizaron biomarcadores para evaluar el estatus inmunológico del paciente, tanto en el periodo pre-trasplante como en diversos tiempos durante el primer año post-trasplante. Se obtuvieron muestras de sangre periférica anticoagulada con EDTA para analizar poblaciones celulares por citometría de flujo y muestras de suero para estudiar la concentración de HLA-G soluble mediante ELISA (mediante el Kit de sHLA-G de Exbio). En el estudio de citometría de flujo se utilizaron combinaciones apropiadas de anticuerpos monoclonales marcados con distintos fluorocromos: anti-CD45, anti-CD14, anti-CD19, anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD28, anti-CTLA-4, anti-CD86, anti- CD25, anti-CD94, anti-CD80, anti-CD95, anti-CD158a/h, anti-CD158b/j y anti-CD56. Los datos fueron recogidos en una base de datos diseñada en Microsoft AccessR y procesados con el paquete estadístico SPSS 15.0 para WindowsR. Las diferencias se consideraron estadísticamente significativas para valores de P < 0.05. Resultados:  El aumento de CD28 en linfocitos T CD4+ se asoció significativamente con la aparición de rechazo agudo, tanto en trasplante cardiaco (p=0.008) como en hepático (p=0.0001). En contraste, el número de células T CD8+CD28- y CD8+CD28-KIR2D+ se expandió de manera significativa después del trasplante en receptores del grupo de no rechazo agudo, en ambos tipos de trasplantes.  El Incremento post-trasplante de HLA-G soluble se detectó específicamente en receptores con rechazo crónico no severo. Conclusiones:  Nuestros resultados apoyan que la expresión de CD28 y la de receptores KIR2D en linfocitos T de sangre periférica, son sensores del estado inmunológico de los receptores de injertos de corazón y de hígado. La sobreexpresión de CD28 en linfocitos T CD4+ y CD8+ en los periodos de mayor frecuencia de rechazo agudo, es indicativa de una alo-respuesta activa, mientras que la acumulación post-trasplante de células T CD8+CD28- y CD8+CD28-KIR2D+ se correlaciona con una mejor aceptación temprana del injerto.  El incremento post-trasplante, pero no el nivel pre-trasplante, de sHLA-G se relaciona directamente con protección frente a rechazo crónico severo.  Incrementos post-trasplante de la intensidad media de fluorescencia de CD28 sobre linfocitos T CD4+ de sangre periférica superiores al 5%, y de sHLA-G en suero superiores al 0.062%, respecto a sus valores pre-trasplante, se han establecido como biomarcadores de utilidad clínica, con capacidad predictiva de rechazo agudo y crónico (rechazo crónico menos severo), respectivamente.Introduction: Heart transplantation is the main treatment option for end-stage heart failure patients. However, immunosuppressive drugs, used in order to prevent graft rejection, may cause infections and malignancies. Therefore, it is necessary to have biomarkers to assess the immune status of each patient and then adjust the immunosuppressive therapy to their characteristics and clinical status. Objectives: The main aim of this study was to monitor peripheral blood biomarkers in order to evaluate the patients immune status before and after heart transplantation and its relationship with the underlying pathology (ischemic and non-ischemic heart disease), the frequency of acute cellular rejection, the severity of the chronic rejection (assessed by intravascular ultrasound), and the frequency and type of infections. The specific objectives of this study were: 1) to analyze and quantify the major leukocyte (leukocytes, monocytes and neutrophils) and lymphocyte (T, B and NK) subpopulations, as well as other molecules related to their function and activation (CD80, CD86 and CD95); 2) to evaluate the expression of CD28 and KIR receptors (KIR2DL1/S1 and KIR2DL2/L3/S2) in lymphocytes T, CD4+ and CD8+, and to compare it with that observed in liver transplant recipients from our center and 3) to evaluate the concentration of soluble HLA-G in serum and its relationship with infections and the development of long-term cardiac grafts. Methods: Biomarkers were monitored in 77 patients with heart transplants in order to evaluate immune status, both in the pre-transplant and at different times during the first year post-transplant. Peripheral blood samples were collected into EDTA anticoagulated tubes to analyze cell populations by flow cytometry and serum samples were used to study the concentration of soluble HLA-G by ELISA (using the Exbio sHLA-G kit). Appropriate combinations of monoclonal antibodies labelled with different fluorochromes were used in the flow cytometry study: anti-CD45, anti-CD14, anti-CD19, anti-CD3, anti-CD4, anti-CD8, anti-CD28, anti-CTLA-4, anti-CD86, anti- CD25, anti-CD94, anti-CD80, anti-CD95, anti-CD158a/h, anti-CD158b/j y anti-CD56. The data were gathered in a Microsoft AccessR database and processed using SPSS 15.0 for WindowsR. P-values <0.05 were considered statistically significant. Results: - The increase of CD28 on CD4+ T lymphocytes was significantly associated with the development of acute rejection, both in heart (p = 0.008) and liver (p = 0.0001) transplantation. On the contrary, the number of CD8+CD28- and CD8+CD28-KIR2D+ cells expanded significantly after transplantation in the recipient group without acute rejection, in both types of transplantation.  An increase in post-transplant soluble HLA-G was detected particularly in recipients with chronic but not severe rejection. Conclusions:  Our results confirm that the expression of CD28 and KIR2D receptors on peripheral blood T lymphocytes of heart and liver transplants recipients act as sensors of the immune system status. The up-regulation of CD28 on CD4+ lymphocytes during periods of higher frequency of cellular acute rejection indicates an active allo-response, whilst the post-transplant accumulation of circulating CD8+CD28- and CD8+CD28-KIR2D+ T cells correlate with better early graft acceptance.  The post-transplant increase, not the pre-transplantation level, of sHLA-G is directly related to a protection against severe chronic rejection  Post-transplant increases in the MFI of CD28 on CD4+ T lymphocytes from peripheral blood by over 5%, and sHLA-G in serum above 0.062%, compared to values pre-transplantation, have been established as biomarkers able to predict acute and chronic rejection (chronic rejection being less severe), respectively.
Primary author: Blanco García, Rosa María
Director: Minguela Puras, Alfredo
Faculty / Departments / Services: Facultad de Medicina
Published in: Proyecto de investigación:
URI: http://hdl.handle.net/10201/35629
Document type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
Appears in Collections:Ciencias de la Salud

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