El gusano de seda, bombyx mori (Linneo, 1758)(Lepidoptera : Bombycidae) como plataforma de producción de proteínas naturales y recombinantes : aplicaciones en biotecnología e ingeniería de tejidos

Abstract

La presente Tesis se propone desarrollar algunas aplicaciones recientes no textiles del gusano de seda (Bombyx mori). La primera es el uso de las larvas del insecto como biorreactor para la producción de proteína recombinante, mediante la inoculación con un vector de expresión baculovirus. Se realizó un ciclo completo de producción de una proteína modelo, la dihidrofolato reductasa. Se desarrolló la cría del insecto en una dieta artificial, se preparó la construcción viral adecuada, se inoculó en larvas y se extrajo y purificó la proteína expresada. La segunda aplicación consiste en la elaboración de la seda como biomaterial para crecimiento y diferenciación celular en la reconstrucción de tejidos. Se optimizó la fabricación de mallas de micro y nanofibras mediante electrohilatura, funcionalizándolas posteriormente con polipirrol para hacerlas electroconductoras. Se evaluó la biocompatibilidad de las mismas con cultivos de fibroblastos y células madre mesenquimales de médula ósea. Palabras clave: Gusano de seda, fibroína, sericicultura, biomateriales, polipirrol, electrohilado.

Summary: The present Thesis aims to develop some recent non-textile applications of silkworm (Bombyx mori). The first is the use of the insect larvae as a bioreactor for the production of recombinant protein, through the inoculation with a baculovirus expression vector. A complete cycle of production was made with the model enzyme dihydrofolate reductase. The rearing of the insect in an artificial diet was developed. After preparing a suitable construct, it was inoculated in larvae and the expressed protein was extracted from the insects and purified. The second application consists of the elaboration of silk as biomaterial for the fabrication of scaffolds for growth and cellular differentiation in tissue regeneration. The fabrication of micro- and nanofiber mats by electrospinning was optimized. The mats were also functionalized with polypyrrole for making them electroconductive. Cell culture methods were carried out, using human fibroblasts and human mesenchymal stem cells, for testing biocompatibility. Key words: Silkworm, fibroin, sericulture, biomaterials, polypyrrole, electrospinning.