Clonación, expresión, caracterización y modelado de esterasas putativas de Corynebacterium glutamicum ATTC 13032

Abstract

El objetivo de este trabajo fue clonar, expresar, purificar y caracterizar algunos genes de Corynebacterium glutamicum ATCC13032, identificados como enzimas de la superfamilia de las esterasas/lipasas. De todos los genes clonados, solo se pudo estudiar la proteína codificada por el gen Cg2528. Se purificó y caracterizó la proteína. Su máxima actividad la presentó 40 ºC y a pH 8. Presentó una gran estabilidad en presencia de disolventes orgánicos como el DMSO y el metanol. Con respecto al análisis cinético, presentó una mayor actividad sobre los p-nitrofenil ésteres y los naftilos que sobre el S-methiltiobutanoato. Se dilucidó la triada catalítica alineando la secuencia de aminoácidos. La estructura tridimensional se predijo usando la esterasa (2OGS) de Geobacillus stearothermophilus como molde.

Abstract Cloning, expression, characterization and modeling of putatives esterases from Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 The aim of this work was to clone, express, purifiy and characterize some genes from Corynebacterium glutamicum ATCC13032, identified as enzymes of the superfamily of esterases/lipases. Among all cloned genes, only the protein encoded by the gene Cg-2528 could be studied. The protein was purified and characterized. The optimum activity was observed at 40ºC and pH 8. The enzyme showed a high activity in presence of organic solvents, such as DMSO or methanol. P-nitrophenyl ester and naphthyl ester derivatives were found to be better substrates than S-methyl tiobutanoate. The catalytic triad was predicted by amino acid sequence alignment and the structure modeling was performed using esterase (2OGS) form Geobacillus stearothermophilus as template.