Efecto de diversas técnicas para visualizar la placa metafásica y el corpúsculo polar sobre la capacidad de desarrollo de ovocitos porcinos madurados in vitro = Effect of several approaches to visualize the metaphase II plate and the first polar body on the developmental ability of in vitro-mature porcine oocytes

Abstract

La transferencia nuclear de células somáticas (SCNT) en la especie porcina se ha convertido en una herramienta muy útil para para la elaboración de modelos genéticos de enfermedades humanas y para el uso en xenotransplantes. Aunque el número de cerdos clonados aumenta cada año, la eficiencia total de esta tecnología es todavía muy baja. Uno de los pasos más difíciles de la SCNT en porcino es la enucleación del ovocito, principalmente debido a que su citoplasma contiene numerosas gotas lipídicas. El principal objetivo de la tesis fue evaluar el efecto de diversas técnicas para visualizar la placa metafásica y el corpúsculo polar sobre la capacidad de desarrollo de ovocitos porcinos madurados in vitro.

Palabras claves: Porcino; Ovocito; Enucleación; Metafase II; Primer Corpúsculo Polar; Hoechst 33342; Irradiación ultravioleta; Distribución de mitocondrias activas; ADN mitocondrial; SYBR-14; Microtúbulo; Microscopio de luz polarizada.

Summary:

Somatic cell nuclear transfer (SCNT) technology in porcine has become a very useful tool for the elaboration of genetic models for human diseases and the use in xenotransplantation. The efficiency of SCNT is still very low, although the number of cloned pigs increases each year. One of the hardest steps of porcine SCNT is the enucleation of the oocyte because its cytoplasm contains many lipid droplets. The main objective of this thesis was to assess the effect of several approaches to visualize the metaphase II plate and the first polar body on the developmental ability of in vitro mature porcine oocytes.

Keywords: Pig; Oocyte; Enucleation; metaphase II; First polar body; Hoechst 33342; Ultraviolet irradiation; Distribution of active mitocondria; mitochondrial DNA; SYBR-14; Microtubule; Polarized light microscopy.