Caracterización cinética de la catálisis, inactivación suicida e inhibición irreversible de tirosinasa

Abstract

En esta Tesis Doctoral se ha profundizado en el mecanismo cinético de actuación de tirosinasa sobre distintas parejas monofenol/o-difenol. A partir de los resultados obtenidos, se puso de manifiesto que la afinidad de la enzima por oxigeno es mayor en la ruta favorecida que en la ruta lenta. Se ha demostrando cinéticamente que desoxitirosinasa existe en dos formas: relajada y tensa (mayor distancia entre los átomos de cobre). Gracias a este estudio, se han determinado dos pKas críticos en tirosinasa. En relación a la caracterización de sustratos de tirosinasa, se han desarrollado una serie de métodos de medida que han permitido caracterizar una gran variedad de o-difenoles, trifenoles, flavonoides y compuestos no fenólicos como aminas aromáticas y o-aminofenoles. Por otra parte, se han realizado estudios cinéticos sobre el proceso de inactivación suicida que sufre tirosinasa cuando actúa sobre sus sustratos proponiendo un mecanismo estructural que explica los resultados obtenidos. In this Doctoral Thesis, we have depth on the kinetic mechanism of action of tyrosinase acting on different pairs of monophenol/o-diphenol substrates. The results obtained revealed that the affinity of the enzyme for oxygen is greater in the kinetically preferred pathway than in the slow pathway. It has been demonstrated kinetically that deoxytyrosinase exists in two forms: relaxed and tense (greater distance between copper atoms). Thanks to this study, we have identified two critical pKas in tyrosinase. Relating to the characterization of tyrosinase substrates, we have developed a series of measurement methods that allow the characterization of a variety of o-diphenols, triphenols, flavonoids and non-phenolic compounds such as aromatic amines and o-aminophenols. Furthermore, kinetic studies have been conducted on the suicide inactivation process that tyrosinase suffers when acting on their substrates and a structural mechanism that explain the obtained results has been proposed.