Cortisol and free thyroxine determination by time-resolved fluorometry in canine serum

Abstract

Validation for canine serum of 2 commercially available time-resolved fluoroimmunoassays (TR-FIAs) designed for analysis of cortisol and free thyroxine (fT4) in human serum was carried out. Included was the study of interference by hemolysis, lipemia, and bilirubinemia. With the dissociation enhancement lanthanide fluoroimmunoassay kits, the intra-assay coefficient of variation (CV) ranged from 6.4% to 8.7% for cortisol and from 5.3% to 9.8% for fT4; the interassay CVs ranged from 5.8% to 10.8% and from 3.9% to 14.1%, respectively. Accuracy was evaluated by comparing cortisol and fT4 results obtained with TR-FIA and those obtained with a validated enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and an equilibrium dialysis (ED) assay, respectively. The regression equations obtained were y = 0.57x  1.18 (r2 = 0.90) for cortisol and y = 0.87x  0.82 (r2 = 0.93) for fT4. The limits of detection for cortisol and fT4 were 4.84 nmol/L and 2.68 pmol/L, respectively. The results of adrenocorticotropinstimulation and dexamethasone-suppression tests were similar to those published previously; likewise, serial dilution of a canine serum sample with a high cortisol content demonstrated that the TR-FIA was immunologically specific. Serial dilution of a serum sample with a high fT4 concentration showed a methodologic bias, a dependence on serum binding capacity, which indicates that the results obtained with this method should be interpreted with caution. Finally, hemolysis and lipemia significantly interfered with cortisol and fT4 measurements, whereas bilirubinemia did not affect the results.

La validation de deux fluoroimmunoessais («time-resolved fluoroimmunoassays», TR-FIAs) élaborés pour la mesure du cortisol et de la thyroxine libre (fT4) dans le sérum humain a été effectuée. Une étude d’interférence par l’hémolyse, la lipémie et la bilirubinémie est incluse. Avec la trousse DELFIA (« dissociation enhancement lanthanide fluoroimmunoassay »), le coefficient de variation (CV) intra-essai s’étendait de 6,4% à 8,7% pour le cortisol et de 5,3% à 9,8% pour la fT4; le CV inter-essai s’étendait de 5,8% à 10,8% et de 3,9% à 14,1%, respectivement. L’exactitude était évaluée en comparant les résultats de cortisol et de fT4 obtenus avec la TR-FIA à ceux obtenus avec une épreuve immuno-enzymatique (ELISA) et une dialyse par équilibre (ED), respectivement. Les équations de régression obtenues étaient y = 0,57x + 1,18 (r2 = 0,90) pour le cortisol et y = 0,87x + 0,82 (r2 = 0,93) pour la fT4. Les limites de détection du cortisol et de la fT4 étaient de 4,84 nmol/L et 2,68 pmol/L, respectivement. Les résultats de stimulation à l’adrénocorticotropine (ACTH) et le freinage à la dexaméthasone étaient semblables à ceux publiés précédemment. Également, une dilution en série d’un échantillon de sérum canin ayant une concentration élevée de cortisol a démontré que la TR-FIA était immunologiquement spécifique. Une dilution en série d’un échantillon de sérum ayant une concentration élevée de fT4 a montré un biais méthodologique, une dépendance de la capacité liante sérique, ce qui indique que les résultats obtenus avec cette méthode devraient être interprétés avec précaution. Finalement, l’hémolyse et la lipémie interfèrent significativement avec la mesure du cortisol et de la fT4 alors que la bilirubinémie n’affecte pas les résultats.