Caracterización de exosomas producidos por células oviductales in vivo e in vitro, en la especie bovina

Abstract

Las vesículas extracelulares (VEs), exosomas y micro vesículas son un tipo de estructuras heterogéneas pre-sentes en la mayoría de los fluidos orgánicos incluyendo el fluido oviductal. Las VEs contienen varios compuestos derivados de la célula original, como proteínas, lípidos, ARNm, miARN y ADN. Las VEs en el oviducto son producidas por las células epiteliales y entre sus funciones se encuentran: la interacción con los espermatozoides, mantener la viabilidad de éstos, participar en la maduración de los ovocitos y en el proceso de fecundación. Durante la fecundación in vitro y con el fin de mejorarla imitando las condiciones in vivo, numerosos investigadores han utilizado cultivos de células del epitelio oviductal bovino (CEOB) con notables mejoras. Estas células producen, entre otros componentes VEs, por ello, en este trabajo hemos planteado un estudio com-parativo de VEs presentes en el fluido oviductal (FO) bovino recogido en momentos próximos a la ovulación (in vivo) y de aquellas VEs producidas en cultivos de CEOB a los 7 días de cultivo (in vitro) comparando el tamaño, la distribución de la población y la concentración de proteína en ambos tipos. Las VEs se identificaron mediante microscopía electrónica, su tamaño mediante dispersión de luz láser y la concentración de proteínas mediante el método Bradford. Los resultados mostraron que el tamaño de las VEs fue similar entre ambos grupos experimentales. Por otro lado, sí que se observaron diferencias en cuanto a la concentración de proteínas. Las VEs obtenidas in vivocontenían mayor cantidad de proteína en su cargo que en las VEs obtenidas in vitro.En cuanto a identificación de las VEs mediante microscopía electrónica de transmisión, solo pudieron ser observadas aquellas obtenidas in vivo. Este hecho podría deberse al lugar de dónde han sido recogidas, al mét-odo de cultivo de células epiteliales oviductales bovinas o la escasez en su producción.

Recent studies have shown that extracellular vesicles may play an important role in modulating the fertili-zing capacity of sperm during their journey through the female reproductive tract. Extracellular vesicles (EVs), exosomes and micro vesicles, are a class of heterogeneous structures found in most body fluids, including bovine oviductal fluid. EVs contain various compounds derived from the original cell, such as proteins, lipids, mRNA, miRNA and DNA. EVs in the oviduct are produced by epithelial cells and their functions include inte-raction with spermatozoa, maintenance of their viability, participation in oocyte maturation and the fertilization process.During the in vitro fertilization process and to improve it by mimicking in vivo conditions, many re-searchers have used bovine oviductal epithelial cell (BOEC) cultures with remarkable improvements. These cells produce, among other components, EVs, for this reason, in this work we have proposed a com-parative study of the EVs present in the bovine oviductal fluid (OF) collected at times close to ovulation (in vivo) and those produced in BOEC cultures after 7 days of culture (in vitro) comparing the size, population distribution and protein concentration in both types. The EVs were identified by electron microscopy, their size by dynamic light scattering and their protein concentration by the Bradford method.The results showed that the size of EVs evaluated per intensity was similar between both ex-perimental groups. However, differences were observed in terms of protein concentration. EVs ob-tained in vivo contained a greater amount of protein in their cargo than the EVs obtained in vitro. Regarding the identification of EVs by transmission electron microscopy, only those obtained in vivo could be observed. This fact could be due to the place of collection, the method of culturing bovine oviductal epithelial cells or the scarcity of their production.