Enfermedad de Chagas en una zona no endémica : evaluación de nuevas técnicas diagnósticas

Abstract

Introducción/objetivos: La falta de un estándar de oro para el diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas (EC), así como la incorporación de nuevas herramientas diagnósticas (PCR, CMIA, ECLIA) hace que el diagnóstico de la EC, tanto en su fase aguda como en su fase crónica, no esté estandarizado. El objetivo de este trabajo es dilucidar la utilidad de las nuevas técnicas disponibles para el diagnóstico de la EC crónica y la EC congénita (ECC).

Material y métodos: Se llevó a cabo un estudio con un pool de sueros de pacientes con EC mediante CMIA durante 10 días consecutivos para monitorizar la calidad de los resultados obtenidos por la técnica, así como un ensayo con controles de calidad suministrados por el PNCQ y la OMS para la evaluación de diferentes técnicas serológicas (CMIA, IFI, ICT) en la detección de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi. Adicionalmente, se realizó un estudio comparativo entre CMIA e IFI con el fin de establecer una equivalencia entre ambas técnicas usando sueros de pacientes con EC. También se realizó un estudio con el objetivo de evaluar diferentes técnicas de biología molecular comerciales (RT-PCR) en la detección de ADN de T. cruzi tanto utilizando ADN purificado del parásito como muestras de pacientes con EC. Además, se evaluó la utilidad de la CMIA en el seguimiento del aclaramiento de anticuerpos de 82 recién nacidos de madre con EC hasta los 12 meses de vida. Por último, se realizó un estudio de coinfección de EC con Strongyloides stercoralis y se evaluó la utilidad del estudio de eosinofilia en el diagnóstico de infección por S. stercoralis, así como la utilidad de los ELISA en el diagnóstico y seguimiento del tratamiento de estrongiloidiasis.

Resultados: Los resultados del control de calidad interno con gestión interna indican que la técnica de CMIA no posee errores aleatorios ni sistemáticos. El coeficiente de variación de las diferentes mediciones fue de 3,48%. En cuanto a los controles de calidad externos, las 3 técnicas estudiadas fueron capaces de detectar anticuerpos anti-T. cruzi en las muestras positivas y no obtuvieron ningún falso positivo en los sueros negativos. Se observó una equivalencia entre los títulos de anticuerpos medidos mediante IFI y determinados rangos de valores (S/CO) de CMIA. Por otro lado, todas las técnicas comerciales para la detección de ADN de T. cruzi fueron capaces de detectar hasta 1,9x10-2 copias/µL de parásito y tuvieron buena concordancia con la PCR “in house” en muestras de pacientes con EC. En cuanto al estudio de aclaramiento de anticuerpos en el recién nacido de madre con EC, a los 9 meses el 81% de los niños eran seronegativos mediante CMIA y el 100% mediante IFI. A los 12 meses todos los niños sin ECC eran negativos mediante ambas técnicas. Por último, la sensibilidad y especificidad de la eosinofilia en el diagnóstico de estrongiloidiasis fue del 95,7 % y 61,1%, respectivamente, y se obtuvo una curación serológica de 70-80% al año de tratamiento con los ELISA empleados en el seguimiento postratamiento. Conclusiones: La técnica de CMIA es robusta y carece de errores aleatorios o sistemáticos. El uso de controles de calidad externos confirma que las técnicas de CMIA, IFI e ICT son adecuadas para el diagnóstico serológico de EC. Las PCR comerciales son útiles para la detección de ADN de T. cruzi tanto in vitro como in vivo. La técnica de CMIA no es lineal, pero podemos establecer un título de anticuerpos mediante IFI para un rango determinado de valores de CMIA. La técnica de CMIA es útil en el seguimiento del aclaramiento de anticuerpos en niños sano nacidos de madre con EC. Los ELISA anti-S. stercoralis son de gran utilidad tanto para el diagnóstico de estrongiloidiasis como para el seguimiento postratamiento.

Background: The lack of a gold standard for the serological diagnosis of Chagas disease (CD), as well as the development of new diagnostic tools (PCR, CMIA, ECLIA) challenges the standardization of the diagnosis of CD both in acute and chronic pase. The objective of this work is to evaluate the performance of the new techniques in the diagnosis of chronic CD and congenital CD (CCD).

Methods: A pool of sera from patients with CD was analyzed using CMIA for 10 consecutive days to monitor the quality of the results obtained by this technique over time. Different serological techniques (CMIA, IFI, ICT) were evaluated for the detection of anti-Trypanosoma cruzi antibodies using external quality assesment from the PNCQ and the WHO. A comparative study between CMIA and IFI was carried out in order to establish an equivalence between both techniques using sera from patients with CD. Several commercial molecular biology assays (RT-PCR) for the detection of T. cruzi DNA were evaluated, using T. cruzi purified DNA and samples from CD patients. In addition, the performance of CMIA for monitoring clearance of maternal antibodies was evaluated in a cohort of 82 newborns of mothers with CD in a 12-month follow-up study. Finally, the usefulness of eosinophilia in the diagnosis of Strongyloides stercoralis co-infection in CD patients, as well as the adequacy of ELISA in the diagnosis and follow-up of strongyloidiasis were assessed.

Results: The internal quality control results indicate that the CMIA technique lacks random or systematic errors (CV 3.48%). The external quality assessment attested the capability of the three techniques studied for the detection of anti-T. cruzi antibodies in the positive samples; false positives results were not obtained. An equivalence between the antibody titers measured by IFI and certain ranges of values (S/CO) of CMIA was observed. All the commercial assays evaluated for the detection of T. cruzi DNA were able to detect up to 1.9x10-2 copies/µL of parasite and had good agreement with in-house PCR in samples from CD patients. Regarding the antibody clearance study in children born to mothers with CD, 81% of children were seronegative by CMIA and 100% by IFI at 9 months of age. At 12 months of age, all children without CCD were negative by both techniques. Finally, the sensitivity and specificity of eosinophilia in the diagnosis of strongyloidiasis was 95.7% and 61.1%, respectively, and a serological cure of 70-80% was obtained by ELISA one year after treatment with ivermectin. Conclusions: The CMIA technique is free of random or systematic errors. The use of external quality controls confirms that the CMIA, IFI and ICT techniques are adequate for the serological diagnosis of EC. Commercial PCR are useful for the detection of T. cruzi DNA both in vitro and in vivo. The CMIA technique is not linear, but an antibody titer could be establish using IFI for a certain range of CMIA values. The CMIA technique is useful in monitoring antibody clearance in healthy infants born to mothers with CD. The detection of anti-S. stercoralis by ELISA is valuable for the diagnosis of strongyloidiasis and for post-treatment follow-up.