Aportaciones al tratamiento de diarreas crónicas inespecíficas en el perro : estudio del perfil farmacocinético de infliximab, tilosina y transferencia de microbiota fecal

Abstract

Para la realización del estudio mediante trasferencia de microbiota fecal, se utilizaron dos grupos siguiendo el mismo protocolo. Un grupo constituido por pacientes del Hospital Veterinario de la Universidad de Murcia: perros con enteropatías crónicas (más de 3 semanas de duración), diagnosticados de IBD a diferentes niveles (estomago, duodeno o colon principalmente) mediante biopsia endoscópica. Un segundo grupo constituido con pacientes de la clínica veterinaria para pequeñas especies Hinckley Vets4pets (Inglaterra): perros con diarrea crónica con respuesta parcial al tratamiento con antibióticos inicialmente tratados con metronidazol y que sufrieron recaída. En todos los casos, los dueños autorizaron la realización de uno o dos TMF y suministraron información sobre la evolución clínica del animal. Se llevo a cabo una clasificación por puntos de la enfermedad inflamatoria intestinal, siguiendo el “Canine Inflammatory Diease Activity Index” (índice CIBDAI descrito por Jergens et al. (2003)). Para la gradación de las heces, se usó el sistema de puntuación “Waltham® faeces scoring system”. Los trasplantes se realizaron, tras pasar 48h desde la administración de la tilosina, por medio de un enema, a dosis de 5 mL/kg, tras dejar descongelar el excremento a temperatura ambiente durante la noche previa a la administración. Tras la primera transferencia se realizaron otras dos con dos días de intervalo entre ellas. Tras la tercera se realizó la última clasificación de la consistencia fecal, observando si existe mejoría clínica. Se realizó a continuación un seguimiento telefónico con el dueño para seguir la evolución del animal y se citó, cuando al paciente cuando se consideró oportuno. En el estudio farmacocinético de la tilosina se utilizaron 5 perros, todos ellos sanos, machos castrados, de raza Beagle cuyos pesos oscilaban entre los 15’6 y 24 Kg. Los animales tenían entre 2 y 3 años de edad. El estudio fue de tipo cruzado en 2 fases, con intervalos entre cada fase de 15 días para asegurar la ausencia de interferencias entre cada uno de los estudios. El antibiótico mencionado se administró a dosis de 5 mg/kg en solución acuosa por vía intravenosa (IV) en la vena cefálica derecha, y por vía oral (PO) mediante la administración de la dosis en polvo pesada e individualizada en cápsulas. Las muestras de sangre (1 mL) se recogieron de la vena cefálica izquierda hasta las 24h desde la administración IV y hasta las 96 h desde la administración PO del fármaco. La determinación analítica de tilosina en las muestras de plasma se ha realizado mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), utilizando el método de Abu-Basha et al. (2012), ligeramente modificado. En el estudio farmacocinético del Infliximab se utilizaron 5 perros, a los que se administró mediante infusión intravenosa lenta, durante 1’5 horas, una dosis de 5 mg/kg, y se mantuvieron en condiciones de hospitalización, durante las primeras 24 horas para después volver a sus perreras de origen. Para evaluar la tolerancia de los perros a la dosis de infliximab administrada, se han realizado análisis sanguíneos, hematológicos y bioquímicos. La determinación analítica de infliximab en las muestras de suero se ha realizado utilizando el kit Promitor IFX© (Grifols, España), un método comercial validado de ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). En el estudio farmacocinético de la tilosina y el infliximab, se ha realizado mediante análisis compartimental y no compartimental. Respecto a los resultados obtenidos con los TFM, el índice CIBDAI tuvo una mejora clínica, tras el trasplante, del 100% en ambos grupos. En el caso del índice Walthan, la mejora se produjo también en el 100%. Además, ninguno de los animales sufrió pérdida de peso después del tratamiento y, en el caso 2 del grupo 2, el paciente no solo recuperó su peso, sino que continuó incrementándolo posteriormente. Todos los animales mejoraron disminuyendo la frecuencia de las deposiciones antes y después de la TFM en el grupo 1, mientras que en el grupo 2 todos mejoraron excepto un caso. Otro de los parámetros que más información aportan sobre el éxito o no del TMF es la evolución de la consistencia de las heces. En nuestro estudio, los resultados han sido bastante positivos de forma que el 100% de los casos ha presentado un aumento de la consistencia de las mismas. La distribución de tilosina en perros se ajusta a un modelo bicompartimental tras la administración intravenosa de 5 mg/kg del fármaco. La semivida de la fase de disposición rápida (t½λ1) para tilosina, ha sido de 1.3 horas, y la de la fase de disposición lenta (t½λz) de 8.89 horas y se ha obtenido un valor de MRT de 10,07 horas. El Cl obtenido ha sido de 0,21 L/kg/h, el Vss adquiere un valor de 2,15 L/kg, en tanto que Vz alcanza un valor de 2,77 L/kg. Tras la administración de tilosina en formulación oral, se ha obtenido una Ka de 2,11 h-1 y una t½ka de 0,33 h. La biodisponibilidad obtenida ha sido del 13,25±1,5%. En cuanto al infliximab, tras su infusión IV, sus concentraciones plasmáticas se ajustan a un modelo monocompartimental. Su t½λz ha sido de 210 horas y su MRT de 331 horas. Cabe destacar que la elevada semivida obtenida, aunque menor que en humanos, permitiría pautas de dosificación largas de hasta 6 semanas en el caso de que se pueda tratar animales afectados de enfermedad inflamatoria intestinal. Su Cl ha sido de 0,0001 L/kg/h, el Vss adquiere un valor de 0,049 L/kg y el Vz alcanza un valor de 0,047 L/kg. Respecto a la tolerancia de los perros al infliximab, no se observó alteración en el hematocrito ni en el recuento de glóbulos rojos, lo que indica que no existe anemia y que la función de la médula ósea es normal. No se ha producido déficit de vitamina B ni de ácido fólico y no cabe esperar trastornos del hígado. Los niveles de leucocitos, segmentados, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos se mantienen en todo momento dentro de los límites admitidos como normales. En el caso de los parámetros bioquímicos ensayados, todos permanecen dentro de los rangos aceptados como normales durante toda la experiencia. En conclusión, el 100% de los animales con IBD tratados con TMF obtuvieron un beneficio clínico. El análisis de los parámetros farmacocinéticos para las dos vías ensayadas para tilosina indican una distribución amplia (Vz = 2.77 L/kg) y suficiente para el posible tratamiento de afecciones en perros con enfermedad inflamatoria intestinal. La permanencia del fármaco infliximab en el perro, tras su infusión IV, atendiendo a la semivida plasmática obtenida ha sido de 210 h (IV), puede permitir establecer unos regímenes de dosificación lo suficientemente amplios para el tratamiento de los procesos intestinales inflamatorios.

For FMT study, two groups were used following the same protocol. One group consisted of patients from the Veterinary Hospital of the University of Murcia: dogs with chronic enteropathies (more than 3 weeks of duration), diagnosed with IBD at different levels (stomach, duodenum or colon mainly) by endoscopic biopsy. A second group consisted of patients from the veterinary clinic for small species Hinckley Vets4pets (England): dogs with chronic diarrhea with partial response to antibiotic treatment initially treated with metronidazole and that relapsed. In all cases, the owners authorized the performance of one or two TMF and provided information on the clinical evolution of the animal. A point-based classification of inflammatory bowel disease was performed, following the "Canine Inflammatory Diease Activity Index" (CIBDAI index described by Jergens et al. (2003)). For stool grading, the "Waltham faeces scoring system" was used. Transplants were performed, 48h after tylosin administration, by enema, at a dose of 5 mL/kg, after allowing the feces to thaw at room temperature overnight prior to administration. After the first transfer, two other transfers were performed two days apart. After the third transfer, the last classification of fecal consistency was performed, observing whether there was clinical improvement. A telephone follow-up was then carried out with the owner to follow the evolution of the animal and the patient was summoned when it was considered appropriate. In the pharmacokinetic study of tylosin, 5 dogs were used, all of them healthy, neutered male Beagles weighing between 15.6 and 24 kg. The animals were between 2 and 3 years of age. The study was a 2-phase crossover study, with intervals between each phase of 15 days to ensure the absence of interference between each of the studies. The aforementioned antibiotic was administered at a dose of 5 mg/kg in aqueous solution intravenously (IV) in the right cephalic vein, and orally (PO) by administration of the weighed and individualized powder dose in capsules. Blood samples (1 mL) were collected from the left cephalic vein up to 24h from IV administration and up to 96 h from PO administration of the drug. Analytical determination of tylosin in plasma samples was performed by high performance liquid chromatography (HPLC), using the method of Abu-Basha et al. (2012), slightly modified. In the pharmacokinetic study of Infliximab, 5 dogs were used, which were administered by slow intravenous infusion, during 1'5 hours, a dose of 5 mg/kg, and were kept under hospitalized conditions, during the first 24 hours and then returned to their home kennels. To evaluate the tolerance of the dogs to the dose of infliximab administered, blood, hematological and biochemical analyses were performed. The analytical determination of infliximab in serum samples was performed using the Promitor IFX© kit (Grifols, Spain), a validated commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method. The pharmacokinetic study of tylosin and infliximab was performed by compartmental and non-compartmental analysis. Regarding the results obtained with FMT, the CIBDAI index showed a 100% clinical improvement after transplantation in both groups. In the case of the Walthan index, the improvement was also 100%. In addition, none of the animals suffered weight loss after treatment and, in case 2 of group 2, the patient not only regained his weight, but continued to increase it afterwards. All animals improved by decreasing stool frequency before and after FMT in group 1, while in group 2 all improved except one case. Another of the parameters that provide the most information on the success or otherwise of FMT is the evolution of stool consistency. In our study, the results have been quite positive, with 100% of the cases presenting an increase in stool consistency. The distribution of tylosin in dogs follows a bicompartmental model after intravenous administration of 5 mg/kg of the drug. The half-life of the fast disposition phase (t½λ1) for tylosin, has been 1.3 hours, and that of the slow disposition phase (t½λz) 8.89 hours and an MRT value of 10.07 hours has been obtained. The Cl obtained was 0.21 L/kg/h, the Vss acquired a value of 2.15 L/kg, while Vz reached a value of 2.77 L/kg. After administration of tylosin in oral formulation, a Ka of 2.11 h-1 and a t½ka of 0.33 h were obtained. The bioavailability obtained was 13.25±1.5%. As for infliximab, after IV infusion, its plasma concentrations conform to a monocompartmental model. Its t½λz was 210 hours and its MRT was 331 hours. It should be noted that the high half-life obtained, although shorter than in humans, would allow long dosing schedules of up to 6 weeks in the case that animals affected by inflammatory bowel disease can be treated. Its Cl has been 0.0001 L/kg/h, the Vss acquires a value of 0.049 L/kg and the Vz reaches a value of 0.047 L/kg. Regarding the tolerance of dogs to infliximab, no alteration in hematocrit or red blood cell count was observed, indicating no anemia and normal bone marrow function. There was no vitamin B or folic acid deficiency and no liver disorders are to be expected. The levels of leukocytes, segmented, lymphocytes, monocytes, eosinophils and basophils remain at all times within the limits admitted as normal. In the case of the biochemical parameters tested, all remain within the ranges accepted as normal during the whole experience. In conclusion, 100% of the animals with IBD treated with TMF obtained a clinical benefit. Analysis of the pharmacokinetic parameters for the two pathways tested for tylosin indicate a wide distribution (Vz = 2.77 L/kg) and sufficient for potential treatment of conditions in dogs with inflammatory bowel disease. The permanence of the drug infliximab in the dog, after its IV infusion, according to the plasma half-life obtained was 210 h (IV), may allow establishing dosage regimens sufficiently broad for the treatment of inflammatory intestinal processes.