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Actitudes de estudiantes universitarios hacia la investigación y el uso de unformación genética humana
(Murcia : Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia, 2006) López García, S.; Fernández Soria M.; Carrillo Verdejo, María Eduvigis; Ordoñana Martín, Juan Ramón; Departamentos y Servicios::Departamentos de la UMU::Anatomía Humana y Psicobiología
El objetivo de este estudio consiste en recabar información sobre los conocimientos y actitudes de una población universitaria acerca de la investigación genética, sus opiniones acerca de cómo y para qué debería ser usada la información personal de este tipo y su disposición a someterse a pruebas genéticas predictivas. La metodología consistió en la administración colectiva, anónima y voluntaria de un cuestionario adaptado de otros similares a una muestra de 232 estudiantes de primeros cursos de Enfermería y Psicología de la Universidad de Murcia. Los resultados muestran un amplio apoyo a la investigación en genética, sobre todo en lo que respecta a las nuevas posibilidades para prevenir, diagnosticar y tratar enfermedades. No obstante hay ciertas áreas que son percibidas como límites éticos, por lo que se percibe necesario un control riguroso en el uso y el almacenaje de la información genética.
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Aportación de la secuenciación masiva de nueva generación en el diagnóstico del síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario mediante el uso de un panel de genes
(2019-07-17) Castillo Guardiola, Verónica; Alonso Romero, José Luis; Ruiz Espejo, Francisco; Sarabia Meseguer, María Desamparados; Escuela Internacional de Doctorado
La incorporación de la secuenciación de nueva generación, en el Laboratorio de Genómica del Servicio de Análisis Clínicos del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA), ha permitido estudiar el Síndrome de Cáncer de Mama y Ovario Hereditario (SCMOH) mediante la realización de un panel de 26 genes, en el que se incluyeron genes de alta y moderada penetrancia. Sin embargo, este aumento de información, con respecto al estudio genético de solo BRCA1 y BRCA2, debe ir acompañado de una correcta interpretación de la misma. Por lo tanto, fue necesario evaluar la utilidad clínica de los estudios genéticos mediante paneles de genes en la población estudiada. Teniendo en cuenta este objetivo general se abordaron también otros objetivos secundarios como: determinar el rendimiento diagnóstico del análisis mediante paneles de genes en la población estudiada y con un test previo de BRCA1 y BRCA2 no informativo, evaluar los criterios de selección, caracterizar las variantes genéticas encontradas desde el punto de vista molecular y clínico, evaluar la frecuencia mutacional de los distintos genes estudiados, llevar a cabo un estudio de correlación genotipo-fenotipo en aquellas variantes clínicamente relevantes y describir la incidencia de variantes de significado clínico desconocido (VUS) obtenidas, así como de las VUS priorizadas. En la presente tesis se partió de una población de 138 familias con estudio previo no informativo para BRCA1 y BRCA2, procedentes de las consultas de consejo genético de los servicios de Oncología del HCUVA y del Hospital General Universitario Morales Meseguer, las cuales habían sido incluidas por cumplir criterios adicionales de selección a los propuestos por la Sociedad Española de Oncología Médica (SEOM). Tras la aplicación del panel de genes BRCA Hereditary MasterTM Plus de Agilent®, se procedió a categorizar las variantes halladas desde el punto de vista molecular y clínico con la ayuda de diferentes herramientas informáticas, bases de datos, publicaciones y programas in silico. Utilizando esta metodología se desarrolló un algoritmo de priorizaron de variantes de significado clínico desconocido. Posteriormente, mediante secuenciación Sanger, se realizó la comprobación de aquellas variantes con relevancia clínica (patogénicas y probablemente patogénicas), cuyo estudio fue ampliado a los familiares, obteniéndose información entre el genotipo y el fenotipo. Finalmente, para comprobar el efecto fundador de la variante c.8251_8254del en ATM se realizó un estudio de microsatélites en las familias afectadas y en población control. Tras la aplicación del panel de genes descrito se ha conseguido mejorar el rendimiento diagnóstico en un 8% en la población estudiada, resultado similar a lo descrito previamente en la bibliografía. Para ello, la aplicación de criterios adicionales de selección de familias no ha contribuido de manera significativa a aumentar el rendimiento diagnóstico con respecto a los criterios de selección propuestos por la SEOM. Con respecto a la categorización de variantes a nivel clínico y molecular, se han detectado un gran número de variantes missense que, en la mayoría de los casos se categorizaron clínicamente como variantes de significado clínico desconocido, mientras que la mayoría de las variantes clasificadas como patogénicas y probablemente patogénicas fueron de tipo nonsense o frameshift. Gracias a la incorporación de un algoritmo de priorización de variantes VUS se consiguió reducir el porcentaje de familias portadoras de este tipo de variantes de un 52% a un 20%, por lo que sería recomendable la utilización de esta herramienta en el análisis de los estudios genéticos. Este estudio también ha aportado la identificación de 14 variantes (4 clínicamente relevantes y 10 VUS) previamente no descritas. Así mismo, destacar que la incidencia de mutaciones en el gen ATM (4,35%) ha sido la más alta descrita hasta la actualidad, y la aportación al rendimiento diagnóstico de la variante 8251_8254del en ATM, presente en dos familias del estudio, provenientes probablemente de un ancestro común de la Región de Murcia. En relación a los estudios de correlación genotipo-fenotipo en los portadores de variantes patogénicas en los genes no BRCA destaca el cáncer de mama unilateral como el fenotipo más frecuente, seguido del cáncer de ovario. En cuanto a las características histopatológicas de los casos cáncer de mama, todos fueron positivos para receptores hormonales, excepto en la portadora de la variante patogénica en TP53. Este resultado es similar a los comunicados en otros estudios.
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Bioinformatic methods for molecular characterization with third generation sequencing : application to antithrombin deficiency
(Universidad de Murcia, 2025-09-24) Cuenca Guardiola, Javier; Fernández Breis, Jesualdo Tomás; Corral de la Calle, Javier; Sin departamento asociado; Escuela Internacional de Doctorado
Las variantes estructurales (VE) han sido difíciles de estudiar y caracterizar por completo hasta la llegada de la secuenciación de tercera generación. Esta permite detectar VE con precisión en sus coordenadas e información del efecto en la secuencia a nivel genómico, gracias a lecturas más largas. Esta tesis estudia cómo mejorar la detección de VE de distintos tipos con secuenciación de nanoporos, con sus resultados recogidos en un compendio de tres publicaciones científicas indexadas. Durante su desarrollo, se presta especial atención a VE relacionadas con la deficiencia de antitrombina, una enfermedad congénita que aumenta el riesgo de sufrir trombosis. Al tratarse de una enfermedad de herencia mendeliana, normalmente causada por mutaciones en un único gen, supone un excelente punto de partida para el desarrollo de métodos que puedan extenderse posteriormente. Objetivos Los objetivos de la tesis son la detección y caracterización, usando datos de secuenciación con nanoporos, de variantes de número de copias mayores de 50 kilobases, de inserciones y deleciones de elementos trasponibles, así como el estudio del posible impacto funcional de estas dos, y la creación de métodos bioinformáticos reproducibles y reusables. Métodos La metodología general ha consistido en el alineamiento de las lecturas de nanoporo, detección de variantes, unión de los conjuntos de variantes y análisis posteriores específicos, como cálculo de cobertura o la detección de secuencias de elementos trasponibles, además de programas propios creados para el propósito de cada trabajo. Para el alineamiento y detección de variantes se han hecho análisis de desempeño considerando minimap2, lra y NGMLR como alineadores, y Sniffles, Sniffles2, CuteSV, SVIM y NanoVar como detectores de variantes. Para asegurar la reproducibilidad, se ha usado conda para distribuir una herramienta, disCoverage, y Snakemake, para una nueva pipeline, RetroInspector. Resultados Los resultados aparecen en tres publicaciones. Primero, se analiza el rendimiento de la secuenciación de tercera generación con duplicaciones y deleciones de gran tamaño. Tras seleccionar los programas con mejor desempeño, se baja exactitud en los resultados, por lo que se presenta un método para filtrar los resultados de estos programas. Se trata de disCoverage, un programa que analiza la salida de detectores de variantes y filtra grandes mutaciones mediante análisis estadístico de cobertura, aunque no es capaz de detectar variantes por sí mismo. Segundo, se presenta un análisis de inserciones y deleciones de elementos trasponibles a nivel genómico, en el que se investiga la diversidad de estas mutaciones, su impacto funcional y se comparan los resultados con otros estudios. Se discute la viabilidad de la secuenciación por nanoporos para detectar mutaciones patogénicas, aunque no se analiza la presencia de secuencias indicadoras de retrotransposición. Por último, se presenta una herramienta que refina la metodología del segundo artículo, incluyendo el análisis de marcas de transposición, aunque con resultados difíciles de interpretar, y la empaqueta en una pipeline, RetroInspector, de sencilla instalación y ejecución, con ficheros documentados y resúmenes gráficos. La tesis en su conjunto presenta el resultado de una labor investigadora con secuenciación de nanoporos, enmarcada en el estado del arte, presentando nuevos métodos y sus limitaciones, comentadas también como futuro trabajo.
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Caracterización clínica y molecular de un grupo de pacientes españoles y alemanes con RASopatías
(Universidad de Murcia, 2020-09-04) López González, Vanesa; Zenker, Martin; Pérez Fernández, Virginia; Guillén Navarro, Encarna; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción. Las RASopatías son un grupo de enfermedades por variantes en genes que codifican componentes o reguladores de la vía RAS/MAPK. Suponen uno de los grupos más prevalentes de anomalías congénitas, incluyendo: síndrome Noonan (NS), Noonan-like con cabello anágeno (NSLH), Noonan-like con o sin riesgo elevado de leucemia mielomonocíta juvenil (NSLL), Noonan con léntigos múltiples (NSML), Cardiofaciocutaneo (CFC), Costello (CS), Neurofibromatosis-Noonan (NFNS) y Legius (LGSS). Objetivo. Caracterización clínica y molecular de pacientes de la Región de Murcia y de Essen (Alemania) con RASopatías y comparación con la literatura. Cálculo de su prevalencia en Murcia, análisis de correlación genotipo-fenotipo y de la adecuación del seguimiento a las guías clínicas. Material y métodos. Estudio retrospectivo, descriptivo y colaborativo internacional entre la Sección de Genética Médica (Servicio de Pediatría) del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) de Murcia, España, y el Institut für Humangenetik del Universitätsklinikum de Essen (IFHU), Alemania. Revisión de historias clínicas de pacientes con diagnóstico prenatal/postnatal de RASopatía confirmado molecularmente, entre 1994-2012 en Essen y 2002-2018 en Murcia. Recogida de datos clínicos, fenotípicos (reconocimiento facial Face2Gene) y genotipo con análisis estadístico. Resultados. 139 casos de RASopatías (3 prenatales), 118 de España y 21 de Alemania, siendo NS el más común (65%). Principales unidades remisoras: Pediatría General, Genética Médica y Cardiología Infantil. Motivos de derivación más frecuentes: rasgos dismórficos y cardiopatía. Edad media en la remisión: 12,45 años. Prevalencia estimada para NS en Murcia: 1/6054 recién nacidos vivos (RNV). Principales hallazgos en NS: cardiopatía (76%), talla baja (53%), microcefalia (40%), discapacidad intelectual (DI) (35%) y leucemia mielomonocítica juvenil (LMMJ) (4%). 2 fallecimientos (2,3%). Asociación entre anomalías linfáticas prenatales y pterigium colli. Reunión de criterios diagnósticos de van der Burgt en todos los clasificados por Face2Gene como típicos frente al 75% de atípicos (p=0,003). Asociación entre bajo peso, talla baja, microcefalia, retraso motor y cirugía cardiaca con DI, también entre anomalías de sistema nervioso central (SNC) y crisis convulsivas. Sin valoración cardiológica 7%, ecografía abdominal 30%, valoración oftalmológica 24%, auditiva 36% y coagulación 41%. NFNS y NSML con rasgos particulares solapantes con NS, con menor frecuencia de hipertelorismo y mayor de lesiones pigmentadas. CFC y CS de novo y con fenotipo clásico. NS, NFNS y NSML mayoritariamente de novo, a diferencia de LGSS. PTPN11 primer gen mutado en frecuencia en NS (74%). 3 variantes nuevas en SOS1, RAF1 y LZTR1, 5 en NF1 y 2 en SPRED1. Correlación genotipo-fenotipo: mayor porcentaje de microcefalia en PTPN11, MCH en RAF1 y neurodesarrollo y talla menos afectados en SOS1. Conclusiones. Presentamos una serie amplia de afectos de RASopatías con manifestaciones clínicas, en su mayoría, superponibles a lo publicado. Destaca en NS una prevalencia elevada de microcefalia, superior en PTPN11, asociada con DI y alteración conductual, no reportada con anterioridad. Parece existir mayor gravedad de la afectación clínica sistémica acompañando a la gravedad del fenotipo craneofacial. La falta de exploraciones complementarias constituye un punto de mejora. El espectro mutacional es similar al descrito, con mayor porcentaje en NS de variantes en PTPN11, probablemente debido a la mayor accesibilidad a su estudio y a su correlación con un fenotipo más clásico. La descripción de 10 nuevas variantes contribuye a la ampliación del conocimiento molecular y los resultados de correlación genotipo-fenotipo a la mejora de la información pronóstica. La prevalencia estimada en la Región de Murcia es inferior a la reportada, siendo preciso el desarrollo de estrategias para la mejora en su detección. Al ser las principales unidades remisoras pediátricas, es necesaria una mayor sensibilización de las especialidades de adultos hacia este grupo de enfermedades.
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Caracterización histológica y expresión inmunohistoquímica de los marcadores p53 y p21 en el trofoblasto placentario en preeclampsia
(2017-01-04) Oviedo Ramírez, María Isabel; Pérez Cárceles, María Dolores; Blanco Carnero, José Eliseo; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción La preeclampsia es una enfermedad frecuente en el embarazo, que se incluye dentro del grupo denominado trastornos hipertensivos del embarazo y constituye hasta un 10% de las gestaciones de forma global. Se ha encontrado incremento de la apoptosis en placentas de mujeres con preeclampsia en comparación con mujeres con embarazos sin esta enfermedad. Existen escasas referencias en relación a la expresión inmunohistoquímica de la p53 y la p21 en el citotrofoblasto y sincitiotrofoblasto de placentas de mujeres con preeclampsia por lo que el presente estudio contribuye al respecto, complementando con la aportación de la expresión de la apoptosis a nivel óptico evaluada con hematoxilina y eosina. Objetivos Los objetivos de este trabajo son describir los principales hallazgos histopatológicos en placentas con preeclampsia, así como describir la expresión inmunohistoquímica de los marcadores p53 y p21. Material y métodos En esta investigación estudiamos placentas procedentes de mujeres del área de salud I (Murcia/Oeste) que durante el embarazo presentaron preeclampsia. Se utilizó un grupo control de mujeres con gestaciones normales. El estudio se realizó en colaboración con el Área de Fisiología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Murcia y la Unidad de Medicina Materno fetal del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca, del cual uno de los facultativos especialistas obtuvo los datos clínicos y muestras biológicas. El estudio histopatológico y la inmunohistoquímica se realizó en el Servicio de Anatomía Patológica de este Hospital. El trabajo fue de tipo observacional, transversal y prospectivo. La muestra final incluyó 53 placentas, de estás 15 correspondieron a placentas de embarazo normal (grupo control), 22 a placentas con preeclampsia pretérmino y 16 a placentas con preeclampsia a término. El estudio microscópico se realizó con tinción de hematoxilina y eosina obteniéndose varias preparaciones histológicas de cada caso. La evaluación inmunohistoquímica se realizó siguiendo la escala de Fulop con marcadores para p53 y p21. Resultados Las placentas con preeclampsia mostraron signos de arteriolopatía decidual (aterosis aguda, necrosis fibrinoide y placentación deficiente), sin evidencia de cambios de este tipo en las placentas del grupo control con embarazo normal. La arteriolopatía decidual en placentas con preeclampsia fue alta (65,8%), encontrándose además mayor número de infartos (55,3%). Por otro lado se encontraron diferencias notables entre las placentas con preeclampsia del grupo pretérmino y a término, observando mayor número de casos de arteriolopatía decidual, aterosis aguda, necrosis fibrinoide y placentación deficiente en el grupo de placentas con preeclampsia pretérmino que en el de término (72,7%, 54,6%,45,4% y 77,3%). Las placentas con preeclampsia pretérmino mostraron mayor incremento de células de hofbauer, cambios estromales y grado severo de presencia de nodos sincitiales ( >50%) siendo estadísticamente significativo. Además se encontró que las placentas con preeclampsia a término mostraron más calcificaciones que el grupo de preeclampsia pretérmino, con diferencias estadísticamente significativas (93,8%). En relación a los estudios de inmunohistoquímica realizados, se encontró que tanto la intensidad, como el grado de expresión de la p53 y p21 en el citotrofoblasto, fue mayor en las placentas con preeclampsia que en el grupo control. La inmunohistoquímica de la p53 en el sincitiotrofoblasto no mostró diferencias, que si fueron detectadas en la tinción de p21 en el sincitiotrofoblasto tanto en intensidad como en el grado de expresión. En cuanto a los dos grupos de placentas de preeclampsia, no se encontraron diferencias significativas en intensidad y grado de expresión de p53. La intensidad de la p21 tanto en el citotrofoblasto como en el sincitiotrofoblasto fue mayor en placentas con preeclampsia pretérmino con tinción marcada en 77,3% y 50% respectivamente mostrando además mayor grado de expresión para este marcador. Conclusiones El grupo de placentas con preeclampsia mostró significativamente una mayor frecuencia de aterosis aguda, necrosis fibrinoide, infartos y placentación deficiente, contrastando con el grupo de placentas sin enfermedad, en las que no se detectaron estos cambios. Las placentas con preeclampsia mostraron diferencias histopatológicas respecto a placentas no patológicas, identificándose una mayor frecuencia de arteriolopatía decidual, lo que evidencia una mayor susceptibilidad al daño vascular estructural. La intensidad y el grado de expresión inmunohistoquímica de la p53 en el citotrofoblasto fue significativamente superior en las placentas con preeclampsia que en el grupo control. La tinción inmunohistoquímica de p21 fue mayor en el citotrofoblasto en las placentas con preeclampsia, tanto en la intensidad como en el grado de expresión, que en el grupo control. También en el sincitiotrofoblasto el grado de expresión fue significativamente superior en el grupo de preeclampsia, que en el grupo sin patología. Las placentas con preeclampsia pretérmino mostraron significativamente una mayor expresión inmunohistoquímica de la p21 en el citotrofoblasto, que en los casos de preeclampsia a término. Observamos una asociación significativa entre la presencia de altas resistencias uterinas y un mayor grado de expresión inmunohistoquímica de la p21 en el citotrofoblasto, hallazgo que podría constituir una interesante línea de investigación futura. SUMMARY Introduction Preeclampsia is a common disease during pregnancy, and is included within the group of diseases known as hypertensive pregnancy disorders and accounts for 10% of overall gestations. Increased apoptosis has been found in the placentas of women with pre-eclampsia unlike women with pregnancies without this disease. There have been few references to p53 and p21 immunohistochemical expression in the cytotrofoblast and syncytiotrofoblast of the placentas of women with pre-eclampsia so that the present study intends to contribute to this area of research, complemented by an analysis of apoptosis at an optical level assessed using hematoxylin and eosin. Objectives The objectives of this study are to describe the main histopathological findings in placental samples of patients with preeclampsia, and to report on the detection of p53 and p21 proteins by immunohistochemistry. Material and methods In our present research we have studied placentas from women in our Healthcare Area I (Murcia/West) who presented with preeclampsia during pregnancy. A group of women with normal gestation was used as the control. The study was carried out in collaboration with the Physiology Department of the Faculty of Medicine at the University of Murcia and the Maternal-Fetal Medicine Unit at the Virgen de la Arrixaca Clinical Hospital, where one of the specialist physicians obtained the clinical data and biological samples. The histopathological study and immunohistochemistry were carried out in the Pathological Anatomy Service at the same hospital. It was a prospective, observational and cross-sectional study. The final sample included 53 placentas, of which 15 were placentas from normal pregnancies (control group), 22 placentas with preeclampsia from preterm pregnancies and 16 placentas with preeclampsia from term pregnancies. The microscopic analysis was carried out using hematoxylin and eosin staining obtaining several histological preparations from each case. The immunohistopathological assessment was carried out following Fulop’s scale with markers for p53 and p21. Results The placentas with preeclampsia showed signs of decidual arteriolopathy (acute atherosis, fibrinoid necrosis and deficient placentation), while there was no evidence of these types of changes in the placentas of the control group (with a normal pregnancy). In placentas with preeclampsia, decidual arteriolopathy was high (65.8%), and there were also a high number of heart attacks (55.3%). In addition there were notable differences between the placentas with preeclampsia in the preterm and the term pregnancy group, with more cases of decidual arteriolopathy, acute atherosis, fibrinoid necrosis and deficient placentation being observed in the group of placentas with preeclampsia in the preterm pregnancy group than in the term group (72.7%, 54.6%,45.4% and 77.3%). The placentas with preeclampsia in the preterm group had a greater increase in Hofbauer cells, stromal changes and a severe level of syncytial nodes present ( >50%), all being statistically significant. Additionally, it was found that the placentas with preeclampsia in term pregnancies had more calcifications than in the preterm pregnancy group with a statistically significant difference (93.8%). With regard to the immunohistochemical analysis carried out, it was found that both the intensity of p53 and p21 in the cytotrophoblast and the grade of expression of these markers, was greater in the placentas with preeclampsia than in the control group. Immunochemical evidence of p53 protein in the syncytiotrophoblast did not show any differences between the groups, detected using p21 staining in the syncytiotrophoblast to analyze the intensity and grade of expression. With regard to the two groups of placentas with preeclampsia, no significant differences were found in p53 protein intensity and expression. The intensity of p21 expression in both cyto- and syncytiotrophoblast was greater in the placentas with preeclampsia of preterm pregnancies using marker staining in 77.3% and 50% respectively, also revealing a higher level of expression for this marker. Conclusions The group of placentas with preeclampsia showed a significantly higher frequency of acute atherosis, fibrinoid necrosis, heart attacks and deficient placentation, contrasting with the group of placentas with no disease, in which no changes were detected. The placentas with pre-eclampsia showed histopathological differences compared to non-diseased placentas, with a higher frequency of decidual atheriolopathy being identified, a finding which reveals greater susceptibility to structural vascular damage. The intensity and grade of p53 immunohistochemical expression in cytotrophoblast was significantly higher in the placentas with preeclampsia than in the control group. Immunohistochemical staining with p21 had a greater intensity and grade of expression in the cytotrophoblast in the placentas with preeclampsia, than in the control group. It was also found that in the syncytiotrophoblast the grade of expression was significantly greater in the preeclampsia group, than in the group without any disease. The placentas with preeclampsia from preterm pregnancies had a significantly higher immunohistochemical expression of p21 in the cytotrophoblast, than in cases of pre-eclampsia in term pregnancies. We have found a significant association between the presence of high uterine artery resistance and a higher immunohistochemical expression of p21 protein in the cytotrophoblast, a finding that could provide an interesting line of research in the future.
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Caracterización molecular, funcional y clínica de la deficiencia congénita de antitrombina : mejoras en el diagnóstico y en la comprensión de su fisiopatología
(Universidad de Murcia, 2024-05-10) Cifuentes Riquelme, Rosa; Corral de la Calle, Javier; Morena Barrio, María Eugenia de la; Escuela Internacional de Doctorado
INTRODUCCIÓN La antitrombina es una N-glicoproteína clave en el sistema hemostático por su actividad anticoagulante, función que amplifica la heparina. La antitrombina está codificada por el gen SERPINC1. Variantes genéticas en SERPINC1 son responsables de más del 75% de los casos con deficiencia de antitrombina, desorden dominante que constituye la principal y más grave trombofilia hereditaria. El correcto diagnóstico de la deficiencia de antitrombina es importante no solo para conocer la base molecular de la trombosis y facilitar un cribado familiar, sino porque también ayuda en el manejo clínico del paciente, incluyendo la duración y tipo de tratamiento anticoagulante. Aunque es un desorden conocido desde hacer casi 60 años, quedan retos por resolver en la deficiencia de antitrombina. Así, este desorden podría estar subestimado, por las limitaciones de los métodos diagnósticos disponibles, mayoritariamente funcionales. Por otra parte, la base molecular de la heterogeneidad clínica en los pacientes con deficiencia de antitrombina es poco conocida. OBJETIVOS 1. Comparar diferentes métodos de diagnóstico molecular de la deficiencia de antitrombina, mostrando sus debilidades y fortalezas. 2. Definir el efecto funcional y clínico de variantes en SERPINC1 que afectan a residuos arginina potencialmente implicados en la interacción con la heparina. 3. Identificar variantes naturales en SERPINC1 que generen nuevas secuencias de N-glicosilación, y caracterizar sus consecuencias funcionales e impacto clínico. 4. Caracterización del efecto funcional y patológico de nuevas mutaciones en SERPINC1 identificadas mediante secuenciación no dirigida en cohortes de pacientes con trombosis. METODOLOGÍA - Analizamos la antitrombina del plasma y el gen SERPINC1 en 663 pacientes, 588 pacientes con sospecha de deficiencia de antitrombina y 75 pacientes COVID en los que se secuenció el exoma completo. - Identificamos variantes de SERPINC1 en base de datos (HGMD®, GnomAD y en manuscritos publicados), que fueron analizadas evaluando la secreción, glicosilación y función de la antitrombina variante generada mediante mutagénesis dirigida y expresadas en células HEK-EBNA. Tanto las antitrombinas plasmáticas como las recombinantes se analizaron mediante Western blot, digestión con PNGasa F, ensayos funcionales con diferentes proteasas, ensayos cromogénicos, inmunoelectroforesis cruzada, y ELISA. El estudio molecular de SERPINC1 se realizó mediante MLPA, secuenciación de Sanger y nanoporo. RESULTADOS /CONCLUSIONES - Las variantes estructurales suponen entre el 5 y el 8% de casos con deficiencia de antitrombina. La combinación de una mutación puntual y una variante estructural, si existe, es muy rara en la deficiencia de antitrombina. - La identificación de falsos positivos por MLPA aconsejan un diseño cuidadoso de las sondas que evite regiones con polimorfismos y la validación de todo resultado positivo. - Las mutaciones de residuos arginina en la antitrombina tienen consecuencias heterogéneas, tanto bioquímica como clínicamente. - Identificamos la tercera heterocigosis compuesta de variantes que afectan la afinidad por heparina, con muy alto riesgo trombótico. - La generación de nuevas secuencias de N-glicosilación en SERPINC1 resultado de mutaciones naturales tienen considerable heterogeneidad atendiendo tanto a su ocupación como a las consecuencias funcionales (defectos de secreción o de afinidad por heparina) y las implicaciones clínicas (generando deficiencias moderadas o graves). - La eficacia de glicosilación podría modularse modificando la disponibilidad de glucosa. - Existe un elevado número de variantes de SERPINC1 identificadas mediante secuenciación del gen en pacientes con trombosis que no se detectan fácilmente con los métodos funcionales comerciales. - Nuestros resultados recomiendan el desarrollo de un sistema de evaluación de deficiencia de antitrombina basado en la inhibición del FVIIa.
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Determinantes prenatales y postnatales de la rápida ganancia ponderal en los primeros 3 meses de vida y alteraciones en el transcriptoma intestinal
(Universidad de Murcia, 2024-07-05) Pastor Fajardo, María Teresa; Larqué Daza, Elvira; Sánchez-Campillo Muñoz, María; Morales Bartolomé, Eva; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción: La rápida ganancia ponderal (RGP) en los primeros meses de vida aumenta el riesgo de presentar obesidad y otras enfermedades en el futuro, por lo que es importante conocer los factores que favorecen su aparición. Se trata de un momento crucial en la maduración intestinal y la RGP podría influir en la expresión génica intestinal. Objetivos: Los objetivos de esta tesis fueron conocer la prevalencia de RGP de 0 a 3 meses en la cohorte de estudio, examinar los factores prenatales y postnatales relacionados con la RGP y analizar las diferencias en el transcriptoma intestinal mediante un método no invasivo en niños de 3 meses con RGP respecto a un grupo control. Metodología: Se incluyeron 611 parejas madre-hijo de la cohorte NELA de la Región de Murcia. La RGP se definió como un incremento de z-score de peso mayor de 0,67 DE de 0 a 3 meses. Se analizaron variables sociodemográficas, de estilo de vida, antropométricas y analíticas recogidas en el embarazo, el parto, al nacimiento, a los 3 y a los 18 meses. En un subgrupo de 61 niños, 23 con RGP y 38 controles, se llevó a cabo a los 3 meses un análisis del transcriptoma intestinal mediante microarray a partir del ARN extraído de las células exfoliadas contenidas en las heces mediante un método no invasivo optimizado por nuestro grupo. Resultados: La prevalencia de RGP de 0 a 3 meses fue del 18,7% utilizando las tablas de la OMS. El modelo de regresión con mayor índice de predicción incluyó la educación secundaria incompleta o inferior materna, el consumo de alcohol ocasional en tercer trimestre, bajo IMC pregestacional y bajo z-score de peso al nacimiento. Las madres de niños con RGP se caracterizaron por mayor consumo de tabaco, una dieta con mayor aporte calórico, de grasas totales y carbohidratos, así como menor adherencia a la dieta mediterránea, pero estas variables no fueron significativas en el modelo de regresión. Los niños con RGP tuvieron a los 3 meses mayor z-score de peso, relación peso/talla y porcentaje de masa grasa, además de presentar 11 veces más riesgo de desarrollar sobrepeso/obesidad a los 18 meses. La expresión génica intestinal fue diferente en los niños con RGP de 0 a 3 meses, que presentaron menor expresión de genes relacionados con las proteínas ribosomales y genes mitocondriales que participan en la fosforilación oxidativa. Estos genes también se relacionaron con la RGP de 0 a 18 meses, obteniendo mayor relevancia los genes ribosomales en este caso. Conclusiones: Los niños con RGP presentan una expresión génica específica, caracterizada por un patrón de ahorro energético que apoyaría la teoría de que se trata de una respuesta postnatal patológica a una situación de desnutrición intraútero. Las variables prenatales maternas IMC pregestacional, educación y consumo de alcohol, junto con un bajo peso al nacimiento, aumentan el riesgo de RGP, por lo que se debe insistir en medidas higiénico-dietéticas en estas madres y un seguimiento estrecho de su embarazo.
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El diagnóstico genético preimplantacional : aspectos biológicos, éticos y jurídicos
(Universidad de Murcia, 2018-02-07) Jiménez González, Joaquín; Fernández Campos, Juan Antonio; Salcedo Hernández, José Ramón; Facultad de Derecho
El diagnóstico genético preimplantacional (DGP) es un método consistente en la selección de embriones tras un análisis previo de su ADN para transferir al útero materno aquéllos que posean determinadas características en virtud de una norma legal, si la hubiera, diversas recomendaciones o intereses personales, socioculturales, económicos e incluso religiosos. Esta realidad ya está afectando, sin necesidad de una edición directa del genoma humano, al patrimonio genético de las próximas generaciones. Sus implicaciones han ocasionado múltiples reacciones de la comunidad científica, la Ética y el Derecho, que todavía no han podido dar una respuesta conjunta a las posibilidades de un método que a afecta a cuestiones fundamentales de las personas. Respecto al DGP se ha discutido ampliamente. Pero en la mayor parte de ocasiones de forma parcial, atendiendo meramente a la técnica, a sus aspectos éticos o jurídicos. A veces se han debatido situaciones de especial interés, como la selección de sexo, el destino de los embriones sobrantes o la autonomía del embrión tras su intervención genética. Entendemos que era necesario realizar un estudio monográfico que englobara todos sus aspectos. Es decir, el desarrollo biológico del embrión, su concepción como persona, la opinión de las religiones, el estudio científico de la prueba, sus aspectos éticos, el análisis de la legislación nacional e internacional, los protocolos establecidos, los factores de influencia sociales, culturales, económicos y religiosos, la libertad reproductiva enfrentada al interés colectivo, y las consecuencias derivadas de su empleo. Para ello hemos acudido al ámbito jurídico internacional y las recomendaciones de sociedades científicas y organismos oficiales de 64 países. Previamente hemos analizado con detenimiento la situación legal y sanitaria del DGP en España y las comunidades autónomas. Para ello se ha realizado un estudio de campo relativo a la protocolización de la prueba en los 17 sistemas públicos de salud autonómicos, y se ha contado con la colaboración de la Comisión Nacional de Reproducción Humana Asistida (CNRHA). Así mismo se ha efectuado un análisis bibliográfico a nivel científico, jurídico, ético y filosófico, además de estudiar los preceptos de las principales religiones respecto al concepto del embrión como persona y el DGP. En conclusión, desde un punto de vista ontológico no es posible acudir a una definición consensuada sobre la entidad conferida al embrión humano, por existir posturas enfrentadas y aparentemente inamovibles. Además, el estudio biológico no aporta en sí pruebas objetivas de la existencia de personalidad en esta fase evolutiva, hecho reconocido incluso por las posturas más conservadoras. Ello no excluye el reconocimiento prácticamente unánime de la existencia de vida humana desde estas fases iniciales, y que por ello al embrión se le deba un respeto especial. Por otro lado, es difícil entender que el ser humano, en el deseo de mejorar su propia existencia, pueda inhibirse en el uso de la biotecnología y el DGP. La propia naturaleza emplea métodos de selección natural que condicionan el éxito de un embarazo en promedios no muy alejados de una fecundación in vitro. Pese a los factores de influencia locales, las sociedades científicas solicitan una unificación de criterios respecto al empleo del DGP, que debe ser consensuada desde el entendimiento multidisciplinar, en un ejercicio democrático y libre de conflictos interesados. Finalmente hemos realizado una propuesta general de aplicación del DGP a nivel nacional e internacional, y hemos defendido la realización de listados de enfermedades susceptibles de aplicación de la prueba. Todo entendido desde un punto de vista multidisciplinar, esto es, desde la Ciencia, la Ética y el Derecho, estableciendo la condición humana como límite que debemos preservar. Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is a consistent method in the selection of embryos after a previous analysis of their DNA to transfer to the maternal uterus those who possess certain characteristics by virtue of a legal rule, if any, or recommendations or personal interests, sociocultural, economic and even religious. This reality is already affecting, without the need for a direct edition of the human genome, the genetic heritage of the next generations. Its implications have led to multiple reactions from the scientific community, the Ethics and the Law, which have not been able to give a joint response to the possibilities of a method that affects fundamental issues of people yet. The DGP has been widely discussed .But in most cases in a partial way with regard to technique, its ethical or legal aspects. Sometimes situations of special interest have been debated, such as the selection of sex, the destination of surplus embryos or the autonomy of the embryo after its genetic intervention. We understand that it was necessary to carry out a monographic study that encompassed all its aspects. That is, the biological development of the embryo, its conception as a person, the opinion of religions, the scientific study of the test, its ethical aspects, the analysis of national and international legislation, established protocols, the influence factors (socioculturals, economics and religious), and the consequences derived from their use. For this we have studied the international legal environment and the recommendations of scientific societies and official bodies of 64 countries. We have previously analyzed carefully the legal and health situation of DGP in Spain and the autonomous communities. To this end, a field study has been carried out regarding the protocolization of the test in the 17 public health systems of the Autonomous Region, and it has been assisted by the National Commission for Assisted Human Reproduction (CNRHA). Likewise, a bibliographic analysis has been carried out at the scientific, legal, ethical and philosophical levels, besides studying the precepts of the main religions regarding the concept of the embryo as a person and the PGD. In conclusion, from an ontological point of view, it is not possible to resort to a consensual definition of the entity conferred to the human embryo, because there are conflicting and apparently immovable postures. In addition, the biological study does not in itself provide objective evidence of the existence of personality in this evolutionary phase, fact recognized even by the most conservative positions. This does not exclude the practically unanimous recognition of the existence of human life from these initial stages, and for that reason the embryo is given a special respect. On the other hand, it is difficult to understand that the human being, in the desire to improve his own existence, can be inhibited in the use of biotechnology and PGD. Nature itself employs methods of natural selection that condition the success of a pregnancy in averages not too far from an in vitro fertilization. Despite local factors of influence, the scientific societies call for an unification of criteria regarding the use of the DGP, which must be agreed upon by the multidisciplinary understanding, in a democratic exercise and free from conflicts of interest. Finally we have made a general proposal for the application of the DGP at national and international level, and we have defended the realization of lists of diseases susceptible of application of the test. All understood from a multidisciplinary point of view, that is, from Science, Ethics and Law, establishing the human condition as a limit that we must preserve.
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Diagnóstico genético preimplantatorio (DGP): juicios éticos emitidos en revistas biomédicas y bioéticas: un análisis crítico de los mismos desde la bioética personalista
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Biología Celular e Histología,, 2009) Arango Restrepo, Pablo
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Estudio del papel del polimorfismo Val108/158 Met del gen humano de la catecol-O-metiltransferasa y su producto, el 2-metoxiestradiol, en el origen y fisiopatología de la preeclampsia
(2015-07-02) Pertegal Ruiz, Miriam; Pertegal Ruiz, Miriam; Hernández García, Isabel; Fenoy Palacios, Francisco José; Facultad de Medicina
Los objetivos de esta tesis fueron por un lado evaluar la asociación entre el polimorfismo funcional Val108/158Met de la catecol-O-metiltransferasa (COMT) fetal y materno y el riesgo de desarrollar preeclampsia (PE), examinando la influencia de dicho polimorfismo en la expresión, la actividad enzimática placentaria de la COMT y en los niveles maternos de su producto, el 2-metoxiestradiol (2ME), en gestantes control y preeclámpticas. Por otra lado, analizamos si los niveles del 2ME están relacionados con diferentes índices de gravedad clínica y biomarcadores de la enfermedad. Llevamos a cabo un estudio caso-control observacional, analítico y prospectivo en 126 gestantes (53 preeclámpticas y 73 gestaciones normales) reclutadas en el Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca de Murcia entre enero de 2010 y enero de 2012. Se extrajeron muestras de sangre de las gestantes antes del parto y, una vez producido el mismo, se tomó sangre del cordón umbilical (fetal) y fragmentos de tejido placentario. Las muestras sanguíneas se utilizaron para realizar los estudios de genotipado, y para medir los niveles maternos de 2ME, y de diferentes biomarcadores relacionados con la PE (homocisteína, sFlt1, PlGF). Por otra parte, en el tejido placentario se realizaron los análisis de expresión y actividad enzimática de la COMT. Finalmente, obtuvimos datos clínicos y analíticos de la historia clínica de las pacientes. Los principales resultados de este trabajo muestran que el genotipo met-met fue el doble de frecuente en la sangre fetal de gestantes preeclámpticas que en las controles. La odds ratio ajustada (ORajt) para el riesgo de PE en dichas mujeres fue de 3.22 [intervalo de confianza (IC) 95%: 1.01, 10.28]. Los análisis del polimorfismo materno de la COMT no revelaron un aumento significativo del riesgo de PE, y tampoco añadió nada el estudio de los haplotipos de la COMT. Al analizar la actividad enzimática in vitro, ésta se vio determinada por el polimorfismo fetal Val108/158Met, siendo menor para el genotipo met-met que para el val-met y el val-val tanto en población total como en la preeclámptica. La actividad de la COMT in vitro no difirió entre controles y preeclámpticas dentro de cada genotipo. En cuanto a la expresión de la COMT soluble, ésta fue menor para el genotipo met-met en ambas subpoblaciones y dicha expresión se correlacionó inversamente con los valores de actividad in vitro, pudiendo por tanto estar determinada dicha actividad por la cantidad de proteína. La expresión placentaria de la COMT soluble no difirió entre controles y preeclámpticas dentro de cada genotipo. En lo que respecta a la actividad in vivo, no encontramos ninguna asociación entre el polimorfismo estudiado y los niveles de 2ME en plasma materno; no obstante los valores de 2ME sí estuvieron significativamente disminuidos en las gestantes con PE frente a las controles (1818.41±189.25 pg/ml vs 2906.43±200.69 pg/ml). Además, las gestantes con PE presentaron unos niveles plasmáticos mayores de homocisteína, condicionando éstos un mayor riesgo de PE, y correlacionándose inversamente con los valores de 2ME, lo que podría contribuir a la menor actividad observada de la COMT in vivo en PE. Por otra parte, los valores plasmáticos de 2ME se correlacionaron con parámetros clínicos y analíticos de gravedad del síndrome como la mayor tensión arterial sistólica pico, la necesidad de una mayor agresividad terapéutica antihipertensiva, el menor peso neonatal o la precocidad de la PE. Finalmente, los niveles maternos de 2ME también se correlacionaron, tanto en la población total como en la preeclámptica, con conocidos factores de desequilibrio angiogénico en PE como el sFlt1 o el PlGF, sugiriendo que el 2ME podría ser un factor clave en el mantenimiento del equilibrio angiogénico necesario para el correcto desarrollo de la gestación. STUDY OF THE ROLE OF VAL108/158MET POLYMORPHISM OF CATECHOL-O-METHYLTRANSFERASE HUMAN GENE AND ITS PRODUCT, 2-METHOXYESTRADIOL, ON THE ORIGIN AND PATHOPHYSIOLOGY OF PREECLAMPSIA The objectives of this thesis were on one hand to assess the association between fetal and maternal catechol-O-methyltransferase (COMT) Val108/158Met functional polymorphism and the risk of developing preeclampsia (PE), examining the influence of this polymorphism in expression and activity of placental COMT enzyme and in maternal plasma levels of its product, 2-methoxyestradiol (2ME), in both control and preeclamptic pregnant women. On the other hand, we analyze whether 2ME levels are associated with different clinical severity index and biomarkers of PE. We conducted an observational, analytical and prospective case-control study in 126 pregnant women (53 preeclamptic and 73 normal pregnancies) recruited at the Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca in Murcia from January 2010 to January 2012. Blood samples of pregnant women were taken before delivery and, immediately after, cord blood (fetal) and placental tissue fragments were taken. Blood samples were used for genotyping studies, and to measure maternal levels of 2ME, and different biomarkers related to PE (homocysteine, sFlt1, PlGF). Moreover, we made the analysis of expression and enzymatic activity in vitro of COMT in placental tissue. Finally, we obtained clinical and laboratory data from the clinical history of patients. The main results of this work show that the genotype met-met was twice as frequent in fetal blood from patients with PE as in controls. The adjusted odds ratio (ORajt) for the risk of PE in these women was 3.22 [95% confidence interval (CI): 1.01 -10.28]. Analyses of maternal COMT polymorphism did no reveal a significant increased risk of PE, and either added nothing COMT haplotypes analysis. When analyzing the enzyme activity in vitro, it was determined by fetal Val108/158Met polymorphism, being lower for met-met genotype than for val-met and val-val both the total population and preeclamptic. The COMT activity in vitro did not differ between control and preeclamptic pregnant women within each genotype. The expression of soluble COMT was lower for the met-met genotype in both subpopulations and this expression was inversely correlated with in vitro activity values, then such activity may be determined by the amount of protein. Placental expression of soluble COMT not differ between controls and preeclamptic within each genotype In respect to in vivo activity, we found no association between the polymorphism studied and levels of 2ME in maternal plasma, however those values were significantly decreased in women with PE compared to control (1818.41±189.25 pg/ml versus 2906.43±200.69 pg/ml). In addition, there were a higher plasma homocysteine levels in preeclamptic women conditioning them at increased risk of PE, and correlated inversely with the values of 2ME in total population, which could contribute to the lower COMT activity in vivo observed in PE. On the other hand, plasmatic 2ME values were significantly correlated with different clinical and laboratory parameters of severity of the syndrome such as higher peak systolic blood pressure, the need for more aggressive antihypertensive therapeutic, lower birth weight or early onset of PE. Finally, maternal 2ME levels were also correlated (in patients with PE and in total population) with known angiogenic imbalance factors present in PE as sFlt1 or PlGF, suggesting that 2ME could be a key factor in maintaining the balance angiogenic necessary for the proper development of gestation.
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Eva y la manzana
(Murcia: Universidad de Murcia, Servicio de Publicaciones, 1995) González Celdrán, José Alfredo
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Evaluación del rendimiento de un modelo clínico-genético en la estimación del tiempo en rango terapéutico de pacientes con fibrilación auricular no valvular tratados con acenocumarol
(Universidad de Murcia, 2021-01-11) Wasniewski, Samantha Natalia; Consuegra Sánchez, Luciano; Soria Arcos, Federico; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción: La eficacia y seguridad del tratamiento con antagonistas de la vitamina K (AVK) en pacientes con fibrilación auricular (FA) depende en gran medida de la capacidad de alcanzar y mantener un adecuado nivel de anticoagulación. A pesar de la introducción de los anticoagulantes orales directos, los AVK continúan siendo el tratamiento anticoagulante más empleado en pacientes con FA a nivel mundial. La calidad de la anticoagulación se evalúa mediante tiempo en rango terapéutico (TRT) definido por Rosendaal. Si bien en los ensayos clínicos se obtiene un TRT relativamente elevado, en el mundo real se sospecha que el control de la anticoagulación no es tan estricto. Además, con el fin de identificar aquellos pacientes que serían buenos respondedores al tratamiento con AVK, se ha propuesto la escala SAMeTT2R2. En el estudio inicial, esta escala presentó un razonable nivel de discriminación, esto es una adecuada capacidad para identificar los pacientes con un TRT adecuado. Sin embargo, dicha escala fue elaborada a partir de una población de pacientes con FA incluidos en un ensayo clínico, por lo que el sesgo de selección y otras limitaciones metodológicas, suscitan dudas sobre su aplicabilidad en práctica clínica real. Finalmente, algunos autores han propuesto que la predicción del TRT podía mejorar con la determinación de polimorfismos genéticos que se han visto implicados en el mecanismo de biotransformación de los AVK. Objetivos: - Estudiar la calidad de la anticoagulación de pacientes con FA no valvular bajo tratamiento con acenocumarol en nuestro medio calculando el TRT mediante el método de Rosendaal. - Estimar el rendimiento de la escala SAMeTT2R2 en la predicción del TRT en nuestra población. - Identificar aquellos factores clínicos y genéticos implicados en un adecuado nivel de anticoagulación con antagonistas de la vitamina K que potencialmente podrían mejorar la capacidad discriminativa de la escala SAMeTT2R2. Métodos: se incluyeron 212 pacientes atendidos en consultas externas de Cardiología diagnosticados de FA no valvular, bajo tratamiento con acenocumarol durante al menos 6 meses y catalogados como adherentes al tratamiento anticoagulante. Elaboramos un modelo de regresión multivariable con el fin de identificar aquellas variables independientes predictoras de un buen control de anticoagulación. Los polimorfismos genéticos VKORC1, CYP2C9*2, CYP2C9*3 y MIR133A2 fueron analizados en todos los pacientes. Resultados: un total de 128 pacientes (60.4%) presentaron un TRT < 70% (TRT medio= 63.2). Identificamos el índice de masa corporal (OR 0.94, IC 95% 0.89 - 0.99, p=0.032) y la ingesta regular de vitamina K (OR 0.53, IC 95% 0.28 - 0.99, p= 0.046) como predictores independientes de un pobre control de anticoagulación. La capacidad discriminativa de un modelo clínico-genético derivado de nuestra cohorte (que incluyó el índice de masa corporal, la ingesta de vitamina K y los polimorfismos analizados) fue significativamente superior comparado con la escala SAMeTT2R2 (estadístico-C 0.658 frente a 0.524, p<0.001). Conclusiones: El estudio de la calidad de anticoagulación con acenocumarol en pacientes con FA no valvular reveló una elevada proporción de pacientes con mal control de dicha terapia en nuestro medio. La escala SAMeTT2R2 presentó muy pobre capacidad predictiva de un TRT adecuado. El índice de masa corporal, la ingesta de vitamina K y los polimorfismos analizados fueron capaces de mejorar la capacidad discriminativa de la escala SAMeTT2R2.
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Exposición materna a disruptores endocrinos no persistentes y biomarcadores de salud perinatal
(Universidad de Murcia, 2023-07-10) Navarro Lafuente, Fuensanta; Mendiola Olivares, Jaime; Torres Cantero, Alberto Manuel; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción: Las exposiciones medioambientales durante los periodos críticos del desarrollo intrauterino se han asociado con diversos efectos adversos sobre la salud, pero los mecanismos biológicos que unirían las exposiciones con dichos efectos no se han caracterizado completamente. Por tanto, existe una falta de evidencia sobre los factores etiológicos modificables, como puede ser la exposición a compuestos disruptores endocrinos (CDEs) o el uso de fármacos durante el embarazo, y la necesidad de identificar factores de riesgo apropiados para la prevención primaria de las patologías asociadas. Los estudios sobre exposiciones ambientales y sus potenciales efectos adversos sobre la descendencia son muy escasos. Así pues, el objetivo de este estudio fue analizar la exposición materna a disruptores endocrinos no persistentes y biomarcadores de salud perinatal en una cohorte al nacimiento. Material y método: La población de estudio son 378 parejas madre-recién nacido de la cohorte al nacimiento “Nutrition in Early Life and Asthma” (NELA), implementada en la Región de Murcia (España) desde Marzo de 2015 a Abril de 2018. Se realizaron sucesivas visitas a las mujeres embarazadas a partir de la semana 20 de gestación, obteniendo información sociodemográfica, estilos de vida, consumo de medicación, así como datos de registros clínicos. La determinación urinaria de los niveles maternos de 10 CDEs (bisfenol A [BPA], bisfenol S [BPS], bisfenol F [BPF], metilparabeno [MtP], butilparabeno [BtP], propilparabeno [PrP], 2,4-dihidroxibenzofenona [BP-1], 2-hidroxi 4-metoxibenzofenona [BP-3] y 4-hidroxibenzofenona [4OH-BP]) se llevó a cabo mediante microextracción líquido-líquido dispersiva (DLLME) y cromatografía líquida de alto rendimiento, combinada con detección de espectometría de masas en tándem (UHPLC-MS/MS) en las muestras de orina materna de la semana 24 de embarazo y del parto. Además, en el parto se recogieron muestras de sangre de cordón umbilical y se realizó un examen físico de los recién nacidos, incluyendo la medición de la distancia anogenital (DAG). El porcentaje de metilación de ADN en las secuencias repetitivas LINE-1 (long interspersed nuclear elements) y Alu (short interspersed nuclear elements, SINEs) en sangre de cordón se obtuvo mediante pirosecuenciación (“Pyromark Q24”, Qiagen). La asociación entre las concentraciones urinarias maternas de CDEs y la metilación de ADN en sangre de cordón se evaluó mediante modelos de regresión lineal múltiple, además de análisis de la covarianza (ANCOVA) para examinar relaciones no monotómicas. La potencial influencia del consumo materno de paracetamol -por trimestre de gestación y durante todo el embarazo- sobre la DAG en niños se examinó también a través de modelos de regresión lineal múltiple. Así mismo, el efecto de la frecuencia de consumo de este fármaco durante el embarazo sobre la DAG se analizó mediante modelos ANCOVA. Resultados: En primer lugar, la concentración urinaria materna de BPA en la semana 24 de embarazo se relacionó directamente con el porcentaje de metilación de ADN en LINE-1 en los niños recién nacidos (beta= 0.06; IC 95%= 0.01; 0.12). Sin embargo, la relación entre estas variables no fue lineal en las niñas recién nacidas: la metilación de LINE-1 fue de 75.45% en las niñas cuyas madres estaban en el primer cuartil de exposición a BPA en la semana 24 de embarazo en comparación con aquellas en el tercer cuartil (77.03% en 3er cuartil; p-valor= 0.003). En segundo lugar, la exposición prenatal a BtP y 4OH-BP en la semana 24 de embarazo resultó en una hipometilación de las secuencias LINE-1 y Alu, respectivamente, en los niños recién nacidos [(beta= - 0.82; IC 95%= -1.28; -0.35) y (beta= -0.29; IC 95%= -0.47; -0.12), respectivamente]. Así mismo, una mayor concentración urinaria materna a PrP en la semana 24 se asoció inversamente con la metilación de LINE-1 en las niñas (beta= -0.02; IC 95%= -0.04; - 0.01). Cabe destacar que no se encontraron diferencias estadísticamente significativas en los niveles de metilación de ADN en relación a las concentraciones urinarias maternas de CDEs en las muestras del parto. Por último, el consumo materno de paracetamol en algún momento del embarazo no estuvo relacionado con la DAG de la descendencia. Aunque se encontró una asociación significativa entre a DAG ano-pene y el consumo de este fármaco en el primer trimestre en los modelos sin ajustar, esta relación desapareció cuando se tuvieron en cuenta las potenciales variables confusoras vinculadas a las variables de estudio. Conclusiones: Los hallazgos del presente estudio sugieren que la exposición prenatal a sustancias químicas o medicamentos con actividad endocrina podría influir en los marcadores de herencia epigenética, aunque no claramente sobre biomarcadores del ambiente hormonal intrauterino, como es la DAG. Los hallazgos en la cohorte NELA muestran algunos resultados diferenciados por sexo de los recién nacidos.
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Factores de origen femenino y masculino relacionados con la fertilidad humana y su aplicación en clínicas de reproducción asistida : proteínas del fluido folicular y genes de compactación del ADN espermático
(Universidad de Murcia, 2023-11-06) Puga Torres, Daysi Tatiana; Romar Andrés, Raquel; Cánovas Bernabé, Sebastián; Escuela Internacional de Doctorado
La infertilidad afecta alrededor del 15% de parejas en edad reproductiva. Su prevalencia se considera similar entre países desarrollados y países en vías de desarrollo; no obstante, está en aumento a nivel mundial por diversos factores clínicos y de hábitos sociales como la obesidad, enfermedades de transmisión sexual, e incluso por postergar la edad para concebir. La infertilidad se ha abordado considerando su origen como femenino o masculino, aunque existe un porcentaje importante de casos definidos como idiopáticos, por lo que existe un interés creciente en el diagnóstico adecuado de la pareja infértil. Dentro del manejo de la infertilidad femenina, muchas mujeres requieren tratamientos de fecundación in vitro (FIV) para lograr un embarazo a término con un niño/a nacido vivo. En una FIV, la recuperación de complejos cúmulus-ovocito (COCs) competentes es importante. Considerando que en esta competencia influye de manera decisiva la contribución de las células del cúmulus y el fluido folicular (FF), el estudio de la composición de este biofluido y su relación con la infertilidad es relevante. De hecho, la oscilación de las concentraciones de proteínas totales del FF podría afectar a la competencia del ovocito; así mismo, los niveles de especies reactivas de nitrógeno (RNS) permitirían evaluar el daño oxidativo de las proteínas presentes en el fluido folicular humano (FFH). Por otro lado, en la infertilidad masculina, entre el 30 y 72% de los casos aún son diagnosticados como idiopáticos, por lo que se han desarrollado pruebas diagnósticas más completas que permiten evaluar factores moleculares y genéticos como posibles causas de la infertilidad. Sin embargo, estas pruebas no son de uso rutinario en la práctica clínica. Entre las causas genéticas estudiadas en relación con la fertilidad masculina se encuentran los polimorfismos en los genes involucrados en la compactación del ADN: PRM1, PRM2, TNP1 y TNP2. También, la expresión de estos genes (ARN) y el estado de protaminación del ADN son de interés en el estudio de la infertilidad masculina. Considerando lo expuesto, y tras una exhaustiva revisión bibliográfica expuesta en el capítulo I, este trabajo pretende abordar el estudio de la infertilidad desde su vertiente femenina y masculina para identificar biomarcadores sencillos y no invasivos que puedan ser utilizados como predictivos del éxito de los tratamientos de fertilidad en la clínica rutinaria y, de este modo, mejorar la eficiencia en los ciclos de reproducción asistida. En el capítulo II se estudió en el FFH, la concentración de proteínas totales (PT), albúmina y globulinas, así como los niveles de proteínas modificadas con nitrotirosina para valorar el grado de estrés oxidativo de este biofluido y su relación con la posterior calidad ovocitaria y embrionaria. Para ello, el FFH de 74 mujeres sometidas a tratamiento de inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) (41 grupo control y 33 mujeres infértiles con diferentes diagnósticos) fue recuperado tras la aspiración folicular y recuperación de los complejos cúmulus-ovocito (COCs). El FFH se centrifugó, filtró y almacenó a -20ºC hasta su análisis. La concentración de PT, albúmina y globulinas se determinó mediante la plataforma analítica COBAS c501 utilizando el método de fotometría automatizada - test colorimétrico, mientras que la medición del nivel de proteínas modificadas con nitrotirosina se analizó mediante el test ELISA 3-nitrotirosina (3-NT). Los resultados mostraron una distribución homogénea de las concentraciones de PT, albúmina y globulinas en el grupo control, mientras que en el grupo infértil se observó una gran variabilidad en esta distribución entre los diferentes diagnósticos de las pacientes. El grupo control alcanzó mayores concentraciones proteicas que el grupo infértil: PT (4.92±0.09 g/dl vs. 4.45±0.12 g/dl), albúmina (1.84±0.06 g/dl vs. 1.66±0.04 g/dl) y globulinas (3.08±0.05 g/dl vs. 2.79±0.09 g/dl). Las mujeres con endometriosis e insuficiencia ovárica tuvieron menores concentraciones de PT y albúmina que las mujeres con otros diagnósticos de infertilidad. Por otro lado, no se encontró diferencia en las concentraciones de 3-NT entre el grupo control (28.40±1.79 ng/ml) vs. infértiles (26.83±2.20 ng/ml) ni hubo diferencias dentro del grupo de mujeres infértiles en base a sus diagnósticos. En el capítulo III se estudiaron los polimorfismos en los genes TNP1, TNP2, PRM1 y PRM2 en hombres mestizo ecuatorianos fértiles e infértiles. Para esto se incluyeron 144 hombres (43 control y 101 grupo infértil) a los que se les realizó un espermiograma y una toma de muestra de sangre periférica. Se realizó extracción de ADN en la sangre periférica, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y secuenciación de estos genes. Se identificaron nueve polimorfismos ninguno de los cuales mostraron relación con la fertilidad y no serían factor de riesgo de infertilidad en el varón. Los polimorfismos identificados fueron rs62180545 en TNP1, rs11640138 y rs56069754 en TNP2, rs201923496 y rs737008 en PRM1, rs749752404, rs1646022, rs2070923 y rs182114260 en PRM2. De este grupo, los únicos polimorfismos no descritos previamente en otras poblaciones fueron rs749752404 y rs182114260, ambos en PRM2. En el capítulo IV se estudió los niveles de protaminación/empaquetamiento de la cromatina y expresión de PRM1 y PRM2 (ARN) en espermatozoides de hombres fértiles e infértiles. Para ello se incluyeron 131 individuos (35 grupo control y 96 pacientes infértiles), a los que se les realizó un análisis de semen. La muestra seminal fue sometida a la técnica de selección espermática swim up y dividida en alícuotas en tubos de criopreservación y almacenadas a -196°C hasta su posterior procesamiento. La evaluación indirecta del empaquetamiento de la cromatina en espermatozoides se realizó mediante el ensayo de cromomicina A3 (CMA3), mientras que para la evaluación de la expresión de los genes PRM1 y PRM2, se realizó extracción de ARN, cDNA y PCR en tiempo real con el reactivo Power SYBR® Green PCR Máster Mix. El gen BETA-ACTINA (BA) fue considerado como gen de referencia. En los resultados se observó mayor porcentaje de espermatozoides con CMA3 en el grupo infértil vs. grupo control (15.37±1.00 vs. 12.10 ±1.01, P=0.01). Dentro del grupo control los niveles de CMA3 estuvieron aumentados en individuos con sobrepeso y obesidad tipo I frente al peso normal, llegando estos niveles a ser igual de elevados que los del grupo infértil. También dentro del grupo control, los individuos con varicocele que se sometieron a operación presentaron menores niveles de CMA3 comparados con los individuos no operados. Por otro lado, al evaluar los niveles medios de expresión (ΔCT) de PRM1 y PRM2, así como el ratio PRM1/PRM2, no se encontraron diferencias entre ambos grupos de estudio. Al evaluar la influencia del índice de masa corporal en los resultados, sólo se encontraron diferencias en el ratio PRM1/PRM2 de pacientes infértiles entre individuos con peso normal vs. sobrepeso (P=0.001). Los resultados de este trabajo sugieren que la concentración de proteínas totales del FFH podría ser considerado como marcador dentro del tratamiento de reproducción asistida; y el análisis del estado de protaminación (CMA3) permitiría una identificación de posible causa de infertilidad en hombres catalogados con infertilidad idiopática.
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Impacto de la evaluación de la reactividad plaquetar y de la presencia de polimorfismos del citocromo P450, 2C19 y paraoxonasa 1 en pacientes remitidos para intervencionismo percutáneo sometidos doble antiagregación
(2016-03-17) Cano Vivar, Pedro; Soria Arcos, Federico; Consuegra Sánchez, Luciano; Facultad de Medicina
Fundamento y objetivos. El valor de los polimorfismos PON1-Q192R, CYP2C19*2 y *17 en la identificación del paciente pobre respondedor a clopidogrel es controvertido. Evaluamos la relación de estos polimorfismos con la reactividad plaquetar y el pronóstico a medio plazo en pacientes con síndrome coronario agudo sometidos a doble antiagregación remitidos para cateterismo cardíaco. Además, con intención de valorar la utilidad clínica de los dispositivos “a pie de cama” de medición de agregabilidad plaquetaria, realizamos un subestudio comparativo entre los dos principales dispositivos de medida de agregabilidad plaquetar: VerifyNow y Multiplate. Material y métodos. Se incluyeron prospectivamente 247 pacientes con síndrome coronario agudo. En todos se dispuso del genotipo (CYP2C19*2, CYP2C19*17, PON1-Q192R). Medimos la reactividad plaquetar con VerifyNow. Se registraron eventos adversos intrahospitalarios (muerte e infarto periprocedimiento) y durante el seguimiento (muerte, infarto miocardio, angina, accidente cerebrovascular y trombosis del stent). Para el subestudio se reclutaron 168 pacientes de nuestro centro y 83 en el Hospital de San Juan (Alicante) con diagnóstico de síndrome coronario agudo o angina estable a los que se les realizó medida de actividad plaquetar mediante los sistemas VerifyNow y Multiplate. El seguimiento y los eventos adversos registrados durante el mismo fueron similares a los del estudio principal. Resultados. Los portadores de alelos *2 de CYP2C19 presentaron una mayor reactividad plaquetar residual (PRU, media [DE], 252[76] vs. 287[74], p=0.002). Los portadores de alelos *17 de CYP2C19*17 o de alelos T (Q) de PON1-Q192R no presentaron una reactividad distinta (p>0.05). En un modelo multivariado para la predicción de pobre respuesta a clopidogrel, la contribución de CYP2C19*2 fue modesta (Wald=7.5; OR para ≥ 1 alelo *2 = 2.786, IC 95% 1.337-5.808). Fueron factores protectores independientes la hemoglobina basal (g/dL, OR 0.666, IC 95% 0.555-0.801) y el uso concomitante de estatinas (OR=0.376, IC95% 0.162-0.873). El índice de masa corporal fue un factor de riesgo (OR=1.074, IC 95% 1.005-1.148). Los polimorfismos estudiados no predijeron eventos adversos. En el caso del subestudio comparativo, identificamos como pobres respondedores a 173 (68.9%) pacientes con PRU > 235 U y 147 (58.6%) con porcentaje de inhibición < 15%, mediante VerifyNow®; mientras con Multiplate®, identificamos a 48 (19.1%) con ABC del ADP test > 53 y 89 (35.5%) con ABC del ADPhs test > 31. La proporción de pacientes no inhibidos fue significativa y sustancialmente más alta con VerifyNow® respecto a su comparador (p<0.05). En el caso de la aspirina, se identificaron a 38 (15.3%) pacientes no inhibidos mediante ARU > 550 y sólo 6 (2.4%) mediante ABC del Aspi Test > 74. Respecto de los tests de respuesta a clopidogrel, la concordancia mayor fue la del porcentaje de inhibición (VerifyNow®) y el ADPhs Test (Multiplate®) siendo κ de -0.266 (p<0.001). En el resto de las comparaciones el valor de κ fue inferior a 0.2. Para los salicilatos, la concordancia observada entre los dos analizadores fue igualmente baja (κ=0.194, p=0.001). En cuanto al evento combinado, tan solo PRU base y TRAP test mostraron un ABC ROC significativamente distinta del 0.5 (ABC ROC = 0.66, IC 95% 0.55-0.76 y 0.66, IC 95% 0.54-0.77 respectivamente). Conclusiones. El polimorfismo de CYP2C19*2 influenció la respuesta a clopidogrel de forma modesta, pero no condicionó un pronóstico distinto en pacientes con síndrome coronario agudo. Los polimorfismos de PON1-Q192R y CYP2C19*17 no influenciaron la reactividad plaquetar ni el pronóstico. En cuanto al subestudio comparativo, el grado de acuerdo en el diagnóstico de pobre respuesta a la aspirina y clopidogrel entre los sistemas VerifyNow® y Multiplate® fue globalmente pobre. La mayor reactividad plaquetar "basal" se asoció con una mayor ocurrencia de eventos adversos. Palabras clave: Isquemia miocárdica, plaquetas, genética, agregometría. ABSTRACT Background and objectives. Previous studies have shown that the metabolism of P2Y12 receptor blockers is influenced not only by CYP2C19*2 but also by PON1-Q192R alelles. We aimed to evaluate the impact of CYP2C19*2 and PON1-Q192R polymorphisms carriage in platelet reactivity and clinical outcome in patients with ischemic heart disease undergoing cardiac catheterization. In addition, intending to evaluate the clinical utility of the devices "bedside " measuring platelet aggregation , we conducted a sub-study comparison between the two main measurement devices platelet aggregability: VerifyNow and Multiplate Methods. We recruited prospectively patients with acute coronary syndrome undergoing cardiac catheterization (n=247). We evaluated the genotype (CYP2C19*2, CYP2C19*17, PON1-Q192R) with TaqMan assay and platelet aggregometry in all patients. We assessed both in and out-of-hospital events (unstable angina, periprocedural and spontaneous myocardial infarction, myocardial infarction, all-cause death, stent thrombosis and stroke) during follow-up. For the substudy 168 patients of our hospital and 83 patients in the San Juan Hospital (Alicante) were enrolled with acute coronary syndrome or stable angina who underwent platelet activity measured by the VerifyNow and Multiplate systems. Monitoring and adverse events recorded during the same were similar to those of the main study. Results. Carriers of CYP2C19*2 alleles showed a significant higher residual platelet reactivity (PRU, mean [SD], 252[76] vs. 287[74], p=0.002). Carriers of PON1-Q192R CT (RQ) and TT(QQ) alleles and CYP2C19*17 did not present a different response to clopidogrel. In a multivariable setting for the prediction of platelet reactivity, the contribution of CYP2C19*2 was modest (Wald=7.5; OR para ≥ 1 alelo *2 = 2.786, 95% CI 1.337-5.808). Independent predictors were baseline hemoglobine levels (g/dL, OR 0.666, 95% CI 0.555-0.801) and the use of statins (OR=0.376, 95% CI 0.162-0.873). Body mass index was a risk factor (OR=1.074, CI 95% 1.005-1.148). Studied polymorphisms did not predict an adverse outcome. In the case of comparative sub-study, we identified as poor responders to 173 (68.9%) patients with PRU> 235 U and 147 (58.6%) percent inhibition with <15% by VerifyNow®; while with Multiplate®, we identified 48 (19.1%) with ABC ADP test> 53 and 89 (35.5%) with ABC test ADPhs> 31. The proportion of patients was not inhibited significantly and substantially higher with respect to VerifyNow® the comparator (p <0.05). In the case of aspirin, they were identified 38 (15.3%) patients not inhibited by ARU> 550 and only 6 (2.4%) by ABC Aspi Test> 74. Regarding tests response to clopidogrel, as agreement was the percent inhibition (VerifyNow®) and ADPhs Test (Multiplate®) being κ of -0266 (p <0.001). In other comparisons κ value was less than 0.2. To salicylates, the observed agreement between the two analyzers was also low (κ = 0.194, p = 0.001). As for the combined event, just PRU base and TRAP test they showed significantly different ABC 0.5 ROC (AUC ROC = 0.66, 95% CI 0.55 to 0.76 and 0.66, 95% CI from 0.54 to 0.77 respectively) Conclusions. CYP2C19*2 polymorphism influenced moderately platelet reactivity but did not show an impact on clinical outcome in patients with acute coronary syndrome. CYP2C19*17 nor PON1-Q192R polymorphisms showed an impact upon platelet reactivity or outcome. As for the comparative substudy, the degree of agreement in the diagnosis of poor response to aspirin and clopidogrel among VerifyNow® and Multiplate® systems was generally poor. Most platelet reactivity "basal" was associated with an increased occurrence of adverse events. Key words. Ischemic cardiac disease, platelets, genetics, aggregometry.
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Investigación biomédica, tratamiento de muestras genéticas humanas y biobancos
(Murcia: Universidad de Murcia, Editum, 2014) Navarro Caballero, Teresa María
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Las colinesterasas del suero humano.
(Murcia : Universidad de Murcia, Sevicio de Publicaciones, 1978) Medina Precioso, Juan Ramón; Departamentos y Servicios::Departamentos de la UMU::Genética y Microbiología
La farmacogenética nace y se desarrolla con el descubrimiento de que, en muchas ocasiones, tales diferencias en la respuesta a los fármacos son hereditarias.
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New genetic defects and mechanisms involved in antithrombin deficiency
(Universidad de Murcia, 2021-06-02) Morena Barrio, Belén de la; Corral de la Calle, Javier; Escuela Internacional de Doctorado
INTRODUCCIÓN La antitrombina es un anticoagulante natural que juega un papel crucial en la hemostasia. Las diferentes proteasas procoagulantes diana y el potente mecanismo inhibidor de esta serpina explican que incluso reducciones moderadas de antitrombina aumenten significativamente el riesgo de trombosis venosa. Así, la deficiencia de antitrombina es la primera y más grave trombofilia, estudiada ampliamente durante más de 50 años. Sin embargo, aún existen retos en torno a este anticoagulante, como conocer los factores implicados en la heterogeneidad clínica, caracterizar las variantes estructurales implicadas y describir la base molecular del 25% de casos sin defecto genético conocido. En esta tesis hemos intentado correlacionar datos genéticos y clínicos en una gran cohorte de pacientes con deficiencia de antitrombina. OBJETIVO El objetivo de esta tesis es aportar información nueva y original sobre este trastorno. Específicamente, pretendíamos describir el impacto clínico de la deficiencia de antitrombina. Además, quisimos caracterizar en profundidad las variantes estructurales implicadas en la deficiencia de antitrombina, e identificar nuevos defectos moleculares responsables de este trastorno. MÉTODOS Hemos estudiado una de las mayores cohortes de pacientes con esta enfermedad rara reclutada durante más de 20 años. En todos los pacientes, se ha realizado estudios funcionales, bioquímicos y moleculares y se han recopilado datos clínicos. Para estudios específicos se empleó expresión recombinante y una novedosa técnica para el análisis de haplotipos. Además, se han utilizado diferentes tecnologías para la caracterización de los defectos moleculares en SERPINC1, incluyendo la secuenciación de tercera generación y la PCR larga. RESULTADOS La deficiencia de antitrombina incrementa notablemente el riesgo de trombosis pediátrica (300 veces mayor que el de la población general). Por el contrario, hemos caracterizado una deficiencia leve de antitrombina de difícil diagnóstico funcional causada por p.Thr147Ala, una mutación con efecto fundador en la población africana. El estudio de la mayor cohorte de variantes estructurales que causan deficiencia de antitrombina empleando diferentes métodos, incluido la secuenciación del genoma completo con tecnología de nanoporos, mostró que son heterogéneas en tamaño y tipo e identificó por primera vez una variante estructural compleja y la inserción de un nuevo retrotransposon. Describimos un mapa detallado de variantes estructurales con zonas calientes intra e intergénicas, y encontramos un mecanismo común que involucra elementos repetitivos, para la formación de variantes estructurales causantes de este desorden. CONCLUSIONES Nuestro estudio proporciona información nueva y original sobre la trombofilia más grave. El alto riesgo de trombosis pediátrica apoya el cribado de ciertos tipos de deficiencia de antitrombina en niños de familias afectadas para beneficiarse de estrategias preventivas. Las mutaciones fundadoras expandidas en diferentes poblaciones, como la descrita en nuestro estudio en población africana, causan deficiencias leves de difícil diagnóstico funcional. Identificamos y caracterizamos un nuevo mecanismo que causa deficiencia de antitrombina: la inserción de un retrotransposón en un intrón. Además, diseccionamos las variantes estructurales implicadas en deficiencia de antitrombina. Nuestro estudio revela que la combinación de diferentes métodos es útil para la caracterización de estos grandes defectos genéticos, pero la secuenciación de nanoporos es el método más adecuado para su completa caracterización.
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La nutrigenética en el tratamiento personalizado de la obesidad y del riesgo metabólico : estudio ONTIME (obesidad, nutrigenética, tiempo, mediterránea)
(Universidad de Murcia, 2019-02-27) Vera Pérez, Beatriz; Garaulet Aza, Marta; Escuela Internacional de Doctorado
Objetivos Los objetivos de la presente tesis doctoral fueron los siguientes: 1. Comprobar si se asocian las variantes génicas de PLIN1 con la pérdida de peso de sujetos sometidos a un tratamiento dietético basado en la dieta mediterránea, e investigar si existe una interacción de este polimorfismo con la hora de la comida para la pérdida de peso. 2. Determinar si las variantes génicas del gen transportador de serotonina SLC6A4 se relacionan con la alimentación emocional o la desinhibición, en una población con sobrepeso u obesa sometida a un tratamiento dietético, y observar si esta asociación afecta a la pérdida de peso. 3. Examinar de forma exhaustiva los factores conductuales y emocionales relacionados con la comida dentro de una misma población (población ONTIME). Por último, y lo más importante, investigar la contribución de factores tales como la genética, estilo de vida y características fisiológicas circadianas en la conexión del cronotipo vespertino con el riesgo de síndrome metabólico. Metodología En esta tesis doctoral hemos estudiado una población con sobrepeso u obesidad que asistieron de manera ambulatoria a clínicas de adelgazamiento y se registraron en el estudio ONTIME (Obesidad, Nutrigenética, TIempo, MEditerráneo). El estudio ONTIME fue registrado en clinicaltrials.gov como NCT02829619. En el primer estudio se analizaron las variables antropométricas y los genotipos PLIN1 [6209T/C (rs2289487), 11482G/A (rs894160), 13041A/G (rs2304795) y 14995A/T (rs1052700)]. La hora de la comida fue determinada mediante un cuestionario validado. En el segundo estudio se examinaron la pérdida de peso, el score de comedor emocional y el score de desinhibición. Se reclutó una submuestra (n = 624) para el genotipado de SLC6A4. Por último, en el tercer estudio se calculó un score de riesgo genético (SRG) que constaba de 15 variantes génicas relacionadas con el cronotipo. Además, se estudiaron una amplia gama de factores conductuales y emocionales relacionados con la comida dentro de la misma población. Conclusiones 1. Demostramos que el SNP PLIN1 6209T>C se asocia con la pérdida de peso en sujetos sometidos a un tratamiento dietético-conductual. Por otro lado, comprobamos que existe una interacción entre el SNP PLIN1 14995A>T y la hora de la comida para la pérdida de peso. Los portadores del genotipo AA pierden significativamente menos peso cuando comen después de las 15:00h que cuando comen antes de dicha hora. Apoyamos la idea de identificar los genotipos PLIN1 en los pacientes para determinar la eficacia del tratamiento de pérdida de peso. 2. El polimorfismo del gen transportador de serotonina SLC6A4 se asocia con la alimentación emocional y la desinhibición en una población obesa o con sobrepeso sometida a un tratamiento dietético-conductual. Además, observamos una interacción entre SLC6A4 y la alimentación emocional, y la desinhibición, para la pérdida de peso. Los portadores del alelo de riesgo S de SLC6A4 que son emocionales con la comida o presentan una alta desinhibición tienen mayores dificultades para perder peso durante el tratamiento dietético. Llevar a cabo una evaluación genética y psicosocial previa al tratamiento dietético podría mejorar la efectividad en la pérdida de peso de personas obesas o con sobrepeso. 3. El cronotipo vespertino se asocia con un alto riesgo de síndrome metabólico. Confirmamos que este alto riesgo no se debe a su genética sino a sus hábitos de vida, especialmente, el sedentarismo y sus conductas alimentarias obesogénicas. Por tanto, se deberían implantar terapias cognitivas para hacer un cambio conductual en el cronotipo nocturno y así revertir o prevenir los trastornos metabólicos.
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El término "preembrión": génesis, bases biológicas que lo sustentan y uso en la literatura científica y bioética
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Biología Celular,, 2007) Ferrer Colomer, Modesto