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    Aportaciones al tratamiento de diarreas crónicas inespecíficas en el perro : estudio del perfil farmacocinético de infliximab, tilosina y transferencia de microbiota fecal
    (Universidad de Murcia, 2022-11-11) Martínez Robles, Ignacio; Ayala de la Peña, Ignacio; Fernández Varón, Emilio; Escuela Internacional de Doctorado
    Para la realización del estudio mediante trasferencia de microbiota fecal, se utilizaron dos grupos siguiendo el mismo protocolo. Un grupo constituido por pacientes del Hospital Veterinario de la Universidad de Murcia: perros con enteropatías crónicas (más de 3 semanas de duración), diagnosticados de IBD a diferentes niveles (estomago, duodeno o colon principalmente) mediante biopsia endoscópica. Un segundo grupo constituido con pacientes de la clínica veterinaria para pequeñas especies Hinckley Vets4pets (Inglaterra): perros con diarrea crónica con respuesta parcial al tratamiento con antibióticos inicialmente tratados con metronidazol y que sufrieron recaída. En todos los casos, los dueños autorizaron la realización de uno o dos TMF y suministraron información sobre la evolución clínica del animal. Se llevo a cabo una clasificación por puntos de la enfermedad inflamatoria intestinal, siguiendo el “Canine Inflammatory Diease Activity Index” (índice CIBDAI descrito por Jergens et al. (2003)). Para la gradación de las heces, se usó el sistema de puntuación “Waltham® faeces scoring system”. Los trasplantes se realizaron, tras pasar 48h desde la administración de la tilosina, por medio de un enema, a dosis de 5 mL/kg, tras dejar descongelar el excremento a temperatura ambiente durante la noche previa a la administración. Tras la primera transferencia se realizaron otras dos con dos días de intervalo entre ellas. Tras la tercera se realizó la última clasificación de la consistencia fecal, observando si existe mejoría clínica. Se realizó a continuación un seguimiento telefónico con el dueño para seguir la evolución del animal y se citó, cuando al paciente cuando se consideró oportuno. En el estudio farmacocinético de la tilosina se utilizaron 5 perros, todos ellos sanos, machos castrados, de raza Beagle cuyos pesos oscilaban entre los 15’6 y 24 Kg. Los animales tenían entre 2 y 3 años de edad. El estudio fue de tipo cruzado en 2 fases, con intervalos entre cada fase de 15 días para asegurar la ausencia de interferencias entre cada uno de los estudios. El antibiótico mencionado se administró a dosis de 5 mg/kg en solución acuosa por vía intravenosa (IV) en la vena cefálica derecha, y por vía oral (PO) mediante la administración de la dosis en polvo pesada e individualizada en cápsulas. Las muestras de sangre (1 mL) se recogieron de la vena cefálica izquierda hasta las 24h desde la administración IV y hasta las 96 h desde la administración PO del fármaco. La determinación analítica de tilosina en las muestras de plasma se ha realizado mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), utilizando el método de Abu-Basha et al. (2012), ligeramente modificado. En el estudio farmacocinético del Infliximab se utilizaron 5 perros, a los que se administró mediante infusión intravenosa lenta, durante 1’5 horas, una dosis de 5 mg/kg, y se mantuvieron en condiciones de hospitalización, durante las primeras 24 horas para después volver a sus perreras de origen. Para evaluar la tolerancia de los perros a la dosis de infliximab administrada, se han realizado análisis sanguíneos, hematológicos y bioquímicos. La determinación analítica de infliximab en las muestras de suero se ha realizado utilizando el kit Promitor IFX© (Grifols, España), un método comercial validado de ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). En el estudio farmacocinético de la tilosina y el infliximab, se ha realizado mediante análisis compartimental y no compartimental. Respecto a los resultados obtenidos con los TFM, el índice CIBDAI tuvo una mejora clínica, tras el trasplante, del 100% en ambos grupos. En el caso del índice Walthan, la mejora se produjo también en el 100%. Además, ninguno de los animales sufrió pérdida de peso después del tratamiento y, en el caso 2 del grupo 2, el paciente no solo recuperó su peso, sino que continuó incrementándolo posteriormente. Todos los animales mejoraron disminuyendo la frecuencia de las deposiciones antes y después de la TFM en el grupo 1, mientras que en el grupo 2 todos mejoraron excepto un caso. Otro de los parámetros que más información aportan sobre el éxito o no del TMF es la evolución de la consistencia de las heces. En nuestro estudio, los resultados han sido bastante positivos de forma que el 100% de los casos ha presentado un aumento de la consistencia de las mismas. La distribución de tilosina en perros se ajusta a un modelo bicompartimental tras la administración intravenosa de 5 mg/kg del fármaco. La semivida de la fase de disposición rápida (t½λ1) para tilosina, ha sido de 1.3 horas, y la de la fase de disposición lenta (t½λz) de 8.89 horas y se ha obtenido un valor de MRT de 10,07 horas. El Cl obtenido ha sido de 0,21 L/kg/h, el Vss adquiere un valor de 2,15 L/kg, en tanto que Vz alcanza un valor de 2,77 L/kg. Tras la administración de tilosina en formulación oral, se ha obtenido una Ka de 2,11 h-1 y una t½ka de 0,33 h. La biodisponibilidad obtenida ha sido del 13,25±1,5%. En cuanto al infliximab, tras su infusión IV, sus concentraciones plasmáticas se ajustan a un modelo monocompartimental. Su t½λz ha sido de 210 horas y su MRT de 331 horas. Cabe destacar que la elevada semivida obtenida, aunque menor que en humanos, permitiría pautas de dosificación largas de hasta 6 semanas en el caso de que se pueda tratar animales afectados de enfermedad inflamatoria intestinal. Su Cl ha sido de 0,0001 L/kg/h, el Vss adquiere un valor de 0,049 L/kg y el Vz alcanza un valor de 0,047 L/kg. Respecto a la tolerancia de los perros al infliximab, no se observó alteración en el hematocrito ni en el recuento de glóbulos rojos, lo que indica que no existe anemia y que la función de la médula ósea es normal. No se ha producido déficit de vitamina B ni de ácido fólico y no cabe esperar trastornos del hígado. Los niveles de leucocitos, segmentados, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos se mantienen en todo momento dentro de los límites admitidos como normales. En el caso de los parámetros bioquímicos ensayados, todos permanecen dentro de los rangos aceptados como normales durante toda la experiencia. En conclusión, el 100% de los animales con IBD tratados con TMF obtuvieron un beneficio clínico. El análisis de los parámetros farmacocinéticos para las dos vías ensayadas para tilosina indican una distribución amplia (Vz = 2.77 L/kg) y suficiente para el posible tratamiento de afecciones en perros con enfermedad inflamatoria intestinal. La permanencia del fármaco infliximab en el perro, tras su infusión IV, atendiendo a la semivida plasmática obtenida ha sido de 210 h (IV), puede permitir establecer unos regímenes de dosificación lo suficientemente amplios para el tratamiento de los procesos intestinales inflamatorios.
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    Estudio de formulaciones poliméricas de liberación controlada de danofloxacino en ovino
    (2014-05-09) Moregó Soler, María Amparo; Cárceles Rodríguez, Carlos; Espuny Miró, Alberto; Facultad de Medicina
    INTRODUCCIÓN Las fluoroquinolonas son fármacos antimicrobianos bactericidas con excelente actividad frente a un amplio espectro de bacterias aerobias y contra micoplasmas. Concretamente danofloxacino es una fluoroquinolona que fue desarrollada exclusivamente para uso veterinario. En su espectro antimicrobiano, ha mostrado ser efectivo frente a bacterias gram-negativas y algunas bacterias gram-positivas, micoplasmas, y patógenos intracelulares, tales como Brucella y especies de Chlamydia. Bacterias responsables de múltiples infecciones en el tracto intestinal, respiratorio o tejido mamario. Dadas sus buenas cualidades farmacocinéticas, como son su bajo porcentaje de unión a proteínas plasmáticas, volúmenes de distribución elevados y buena penetración en células y tejidos, son valiosos agentes para el tratamiento de infecciones causadas por bacterias intracelulares. Po otra parte, la liberación controlada de fármacos administrados por vía parenteral ha adquirido una importancia creciente en el desarrollo de nuevas formulaciones farmacéuticas. Resulta interesante poder administrar el medicamento con amplios intervalos, lo que supone un menor coste y un menor estrés de manejo de los animales. OBJETIVOS Después de lo anteriormente mencionado, se plantearon los siguientes objetivos para el presente estudio: 1. Determinación de los parámetros farmacocinéticos de danofloxacino tras la administración intravenosa y subcutánea, en solución acuosa, en ovino. 2. Determinación de los parámetros farmacocinéticos de danofloxacino tras su administración subcutánea, en solución de P407 al 25% y en solución de P407 al 25% más carboximetilcelulosa al 2%, en ovino. 3. La determinación y cuantificación de la eliminación de dicha fluoroquinolona en la leche, dependiendo de la vía de administración y la formulación, como base para determinar su utilidad en el tratamiento de mamitis. 4. Determinación de las CMI de este antibiótico para Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus como gérmenes representativos de procesos infecciosos respiratorios y mamarios en la especie a estudiar. 5. Obtención de la formulación, vía/s de administración y pauta/s posológica/s más adecuada/s en la oveja para el tratamiento de infecciones sistémicas, en base a las CMI obtenidas y al estudio PK/PD. METODOLOGÍA El estudio se ha realizado sobre 5 ovejas todas ellas sanas y adultas y con pesos que oscilaban entre 72 y 106 Kg. Con una edad entre 2,5 y 3,5 años y de raza Lacaune. A cada animal se le administró una dosis única única IV o SC de danofloxacino a la dosis de 6 mg/kg o de 18 mg/kg en solución del polímero P407 al 25% (SC1) y en solución del polímero P407 al 25% más carboximetilcelulosa al 2% (SC2). Las muestras de sangre fueron recogidas antes de inyectar el fármaco (tiempo 0 o pre-tratamiento), y a 0,083, 0,167, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 72 y 96 horas tras la administración. Las muestras de leche fueron ordeñadas inmediatamente antes y después de la administración del fármaco a 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 72 y 96 horas. Este estudio fue aprobado por el comité bioético de la universidad de Murcia. La determinación de danofloxacino en plasma y leche se realizó mediante HPLC con detección fluorimétrica y el ajuste a modelos farmacocinéticos compartimentales y no compartimentales se realizó mediante el programa farmacocinético WinNonlin Professional® (Versión 5.2.1). Además se determinó la concentración mínima inhibitoria de dicha fluoroquinolona frente a Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis. RESULTADOS Y CONCLUSIONES La semivida plasmática en la fase terminal para danofloxacino en las distintas formas de administración IV, SC, SC1, y SC2 fueron: 3,87 ± 0,65, 5.18 ± 0.84, 10.27 ± 3.59 y 13.49 ± 2.90 h, respectivamente. En el análisis farmacocinético de la leche se determinan parámetros como Cmax reportando valores para las vías IV, SC, SC1 y SC2 de 28734.02 ± 11069.35, 20344.02 ± 4636.72, 44370.58 ± 20548.37 y 30829.29 ± 8400.38 µg/L respectivamente. Los valores de la ratio AUCleche/AUCplasma fueron de 12.81 ± 3.62, 13.53 ± 3.46, 25.42 ± 9.25 y 27,12 ± 8.02 respectivamente para las distintas vías y la ratio Cmáx-leche/Cmáx-plasma de 4.73 ± 1.81, 12.04 ± 4.89, 17.38 ± 6.55 y 18.11 ± 4,85 respectivamente. De las cepas estudiadas frente a danofloxacino, con un rango de concentraciones entre 0,250 mg/L – 0,0625 mg/L se obtuvo como CMI90, un valor de 0,125 mg/L para danofloxacino. Por lo tanto las ratios AUC/CMI obtenidos fueron: 83,7±13,34 para IV, 85,1±10,19 para SC, 57,67±12,21 para SC1 y 73,94±18,92 para SC2, y los valores de las ratios Cmáx/CMI fueron 36,88±4,56, 13,67±2,08, 6,76±1,08 y 8,23±1,3 respectivamente. De dicho estudio se puede concluir que: 1. La permanencia de danofloxacino es superior tras la administración subcutánea SC1 y SC2, por tanto, serían las mejores formas de administración a fin de obtener concentraciones plasmáticas durante un mayor tiempo. 2. Que los valores de los ratios Cmáxleche/Cmáx plasma y AUCleche/AUCplasma, son muy superiores a uno en todos los casos para las vías extravasculares, e indican que el fármaco tiene un alto grado de acceso y acumulación desde el plasma hacia la leche. 3. Con una dosis de 18 mg/kg de danofloxacino administrado mediantes las formulaciones SC1 y SC2, obtendríamos según los parámetros farmacocinéticos/farmacodinámicos, el éxito clínico y evitaríamos la aparición de resistencias. INTRODUCTION Fluoroquinolones are bactericidal antimicrobial agents with excellent activity against a broad spectrum of aerobic bacteria and mycoplasma. Concretely danofloxacin is a fluoroquinolone that was developed exclusively for veterinary use. In its antimicrobial spectrum, it has been shown to be effective against gram negative bacteria and some gram-positive, mycoplasma, and intracelular pathogens, such as Brucella and Chlamydia. Bacteria responsible for multiple intestinal and respiratory infections or breast tissue infections. Given the good pharmacokinetic properties, such as their low percentage of protein binding, high volume of distribution and good penetration in cells and tissues, are valuable agents for treating infections with intracellular bacteria. In other hand, the controlled release of drugs administered parenterally has become increasingly important in the development of new pharmaceutical formulations. It is interesting to administer the drug with broad ranges, which means lower costs and less stress in the handling of the animals. OBJECTIVES After the above, the following objectives for this study were raised: 1. Determination of pharmacokinetic parameters of danofloxacino after intravenous and subcutaneous administration in aqueous solution in sheep. 2. Determination of pharmacokinetic parameters of danofloxacino after subcutaneous administration at a dose of 18 mg / kg with the p407 polymer solution of 25% (SC1) and P407 polymer solution of 25% plus carboxymethylcellulose 2% (SC2). 3. Determination and quantification of danofloxacin elimination in milk, depending on the route of administration and formulation as a base to determine their utility in mastitis treatment. 4. MIC determination of this antibiotic for Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus like representative germs for respiratory and mammary infections in this species studied. 5. Obtention of formulation, route of administration and regimen dosage more appropriate for the treatment of systemic infections in sheep, based on the MIC obtained and PK/ PD study. METHODOLOGY The study has been carried on five healthy adult sheep of Lacaune breed with weights ranging from 72 to 106 kg and aged between 2.5 and 3.5 years. Administration routes and doses have been intravenous (IV) and subcutaneous (SC) doses of 6 mg/kg and subcutaneous administration at a dose of 18 mg / kg with the P407 polymer solution of 25% (SC1) and P407 polymer solution of 25% plus carboxymethylcellulose 2% (SC2). The samples were obtained immediately before dosing (blank) and 0.083, 0.167, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2. 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36, 48 and 72 h after dosing. This study was approved by the bioethical committee of the University of Murcia. Danofloxacin determination in plasma and in milk was done with HPLC with fluorimetric detection and the compartmental and non compartmental pharmacokinetic adjustment modeling was done using WinNonlin® Professional (Version 5.2.1). In addition, the minimum inhibitory concentration of the fluoroquinolone was determined against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis. RESULTS AND CONCLUSIONS Plasma half-life for danofloxacin in the terminal phase for the different forms of administration IV, SC, SC1, and SC2 were: 3,87 ± 0,65, 5.18 ± 0.84, 10.27 ± 3.59 y 13.49 ± 2.90 h, respectively. Pharmacokinetics analysis of milk parameters like Cmax were determined and reporting values for the IV, SC, SC1 and SC2: 28734.02 ± 11069.35, 20344.02 ± 4636.72, 44370.58 ± 20548.37 y 30829.29 ± 8400.38 µg/L respectively. AUCleche/AUCplasma ratio values were de 12.81 ± 3.62, 13.53 ± 3.46, 25.42 ± 9.25 y 27,12 ± 8.02 respectively f or different routes and the ratio Cmáx-leche/Cmáx-plasma values were 4.73 ± 1.81, 12.04 ± 4.89, 17.38 ± 6.55 y 18.11 ± 4,85 respectively. The strains were studied against danofloxacin, with a concentration range of 0.250 mg /L - 0.0625 mg/L reported MIC90, value of 0.125 mg / L. The ratios AUC / MIC were: 83.7 ± 13.34 for IV, 85.1 ± 10.19 for SC 57.67 ± 12.21 for SC1 and 73.94 ± 18.92 for SC2, and values of Cmax / MIC ratios were 36.88 ± 4.56, 13.67 ± 2.08, 6.76 ± 1.08 and 8.23 ± 1.3 respectively. From this study it can be concluded that: 1. Permanence of danofloxacin is higher after SC1 and SC2, therefore, SC1 and SC2 will get plasma concentrations for a longer time. 2. Cmáx leche/Cmáx plasma and AUC leche/AUC plasma ratio values for extravascular routes are elevated in all cases, which indicate that the drug reaches high penetration and accumulation in milk. 3. With 18 mg/kg de danofloxacino administered through SC1 and SC2 formulation, we would obtain clinical success and the prevention of bacterial resistance development according to pharmacokinetic / pharmacodynamic parameters.
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    Estudio farmacocinético de cefonicid en la especie caprina
    (Universidad de Murcia, 2019-09-04) Badillo Puerta, Elena; Marín Carrillo, Pedro; Escudero Pastor, Elisa; Escuela Internacional de Doctorado
    En el presente estudio se ha llevado a cabo el análisis de las características farmacocinéticas de cefonicid en la especie caprina tras su administración por vía intravenosa, intramuscular y subcutánea a una dosis de 10 mg/kg y tras la administración de una dosis de 20 mg/kg por vía subcutánea de una formulación de liberación sostenida en gel de Poloxámero (P407) y 2-hidroxipropil--ciclodextrina. La finalidad de esta investigación fue establecer el comportamiento del fármaco en esta especie, así como su potencial excreción en leche. La determinación analítica de las concentraciones de cefonicid en plasma se llevó a cabo mediante HPLC con detección ultravioleta. Los datos obtenidos de niveles de concentración plasmática a lo largo del tiempo ajustaron a modelos farmacocinéticos compartimentales y no compartimentales, utilizando diferentes programas como MULTIFIT y WinNonlin Professional, respectivamente. Los datos observados para las concentraciones plasmáticas en relación al tiempo de cefonicid tras las diferentes administraciones (intravenosa, intramuscular, subcutánea y subcutánea con fórmula de liberación sostenida) presentan un mejor ajuste al modelo monocompartimental abierto. Tras la administración intravenosa, el valor de vida media obtenida (½λz) fue de 0,213  0,027 horas con un tiempo medio de residencia (MRT) de 0,268  0,051 horas. El volumen aparente de distribución para cefonicid calculado en función del área bajo la curva (Vz) fue de 0,174  0,03 L/kg mientras que en el estado estacionario (Vss) fue de 0,141 ± 0,023 L/kg. Estos datos muestran una distribución moderada del fármaco hacia órganos y tejidos. Cefonicid presntó un valor de aclaramiento plasmático de 0,531  0,073 L/kg·h, lo que implica una eliminación rápida del organismo. Las formulaciones extravasculares por vía intramuscular y subcutánea registraron valores de vida media de 0,433  0,05 horas y 0,576  0,149 horas respectivamente. Sus valores de MRT fueron de 0,799  0,117 horas para la vía intramuscular y 0,982  0,228 horas para la subcutánea. Para la formulación de liberación subcutánea en gel de Poloxámero y ciclodextrina administrada por vía subcutánea se obtuvo un valor de vida media de 1,235  0,167 horas con un MRT de 1,984  0,175 horas. Los datos obtenidos mostraron una mayor permanencia de cefonicid en el organismo tras su administración en formulación de liberación sostenida, así como una absorción más lenta que para el resto de vías extravasculares. La biodisponibilidad de cefonicid es elevada tras la administración intramuscular (F = 75,344  11,277 %) y subcutánea (F= 71,093  19,136 %), siendo mejor en el caso de la administración subcutánea con fórmula de liberación sostenida para la que el valor de biodisponibilidad obtenido es de 102,84  15,157 %. En el caso de la leche, no se detectaron concentraciones de cefonicid por encima del límite de cuantificación obtenido para la técnica, en ninguna de las muestras tomadas tras las diferentes vías de administración estudiadas, lo que demuestra su escasa eliminación en este fluido, y la posibilidad de utilizarlo en cabras que estén en periodo de lactación, ya que no se generarán residuos. Se ha establecido una pauta posológica para cefonicid en base a la integración farmacocinética/farmacodinámica, tomando como referencia el parámetro T>CMI y una CMI de 2 mg/L. Para las vías de administración intramuscular y subcutánea se aseguraría el éxito del tratamiento para un intervalo de administración cada 4 horas mientras que, en el caso de la vía de administración subcutánea con fórmula de liberación sostenida, el intervalo entre dosis se duplica hasta las 8 horas, resultando una pauta preferible por la disminución de manejo que supone.
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    Estudio farmacocinético de formulaciones poliméricas de liberación controlada para enrofloxacino en ovino.
    (2013-09-19) Gabarda Cassinello, Mª Luisa; Fernández Varón, Emilio; Facultad de Veterinaria
    OBJETIVO: Estudiar el comportamiento cinético de enrofloxacino y su metabolito, ciprofloxacino, en ovejas, tras la administración por las vías intravenosa y subcutánea de una dosis de 5 mg/kg, y tras la administración en solución del polímero P407 al 25% y en solución del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2% por vía subcutánea a la dosis de 15 mg/kg. METODOS: La determinación de enrofloxacino y de ciprofloxacino en plasma y leche se realizó mediante HPLC con detección fluorescente, siguiendo el método descrito por Siefert y cols. (1999). El ajuste a métodos farmacocinéticos compartimentales y no compartimentales se realizó mediante el programa WinNonlin Professional® y MULTIFIT® (Proost, 1997). El criterio utilizado para determinar cuál era la ecuación que mejor describía la evolución de los datos experimentales en cada caso, fue el Criterio de Información de Akaike (AIC) (Yamaoka y cols., 1978). RESULTADOS: Tras la administración intravenosa, enrofloxacino y ciprofloxacino se distribuyen según un modelo bicompartimental abierto, al igual que para las vías extravasculares. Tras la administración intravenosa, la vida media obtenida para el enrofloxacino (t1/2λz) fue de 8,11 ± 2,22 h con un tiempo medio de residencia (MRT) de 5,41 ± 1,49 h. Los volúmenes aparentes de distribución de enrofloxacino calculados en función del área bajo la curva (Vz) y en estado estacionario (Vss) resultaron ser de 0,89 ± 0,26 L/kg y 2,01 ± 0,52 L/kg respectivamente, indicando una amplia distribución orgánica. Por lo que respecta al aclaramiento plasmático (Cl), éste alcanzó un valor de 0,16 ± 0,03 L/kg•h. Cuando se administró el enrofloxacino vía subcutánea sin polímero, vía subcutánea en solución del polímero P407 al 25% y vía subcutánea en solución del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2%, se obtuvieron los siguientes tiempos de vida media: 13,00 ± 2,11, 34,80 ± 8,47 y 38,66 ± 8,97 h, respectivamente, con unos valores de MRT de 7,92 ± 0,67, 20,74 ± 3,57 y 22,71 ± 2,32 h, respectivamente. La biodisponibilidad de enrofloxacino cuando se administró por vía subcutánea sin polímero, alcanzó un valor de 104,72 ± 24,45 %. Valores algo inferiores se obtuvieron cuando se administró el enrofloxacino vía subcutánea en solución del polímero P407 al 25% y en solución del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2%, que fueron de 82,01 ± 22,06 % y 84,01 ± 21,57 %, respectivamente. En cuanto al metabolito de ciprofloxacino, tras la adminstración intravenosa de enrofloxacino la vida media de ciprofloxacino fue de 6,83 ± 3,00 h con un valor de MRT de 6,36 ± 1,71h. Cuando se administró el enrofloxacino vía subcutánea sin polímero, vía subcutánea en solución del polímero P407 al 25% y vía subcutánea en solución del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2%, se registraron los siguientes tiempos de vida media para su metabolito ciprofloxacino: 10,62 ± 4,35, 7,15 ± 5,44 y 20,61 ± 6,06 h, respectivamente, con unos valores de MRT de 11,90 ± 2,05, 16,78 ± 3,77 y 21,39 ± 4,85h, respectivamente.Se determinaron las concentraciones mínimas inhibitorias de enrofloxacino y de ciprofloxacino frente a cepas de Staphylococcus aureus, a fin de determinar los índices farmacocinético-farmacodinámicos óptimos. CONCLUSIONES: De dicho estudio se puede concluir que una dosis de 15 mg/kg podría ser efectiva por vía subcutánea cuando se administre junto con polímero P407 al 25% o junto con polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2%, en ovejas contra aislados bacterianos con CMI  0,5 µg/mL. La penetración en leche de enrofloxacino alcanzó unos ratios bajos, con unas relaciones AUCleche/AUCplasma cercanas a 0,5 en las vías subcutáneas y de 1 en la vía intravenosa. En el ciprofloxacino alcanzó unos ratios elevados, alcanzando relaciones del 10-20. OBJECTIVE. To study the pharmacokinetics of enrofloxacin and its metabolite, ciprofloxacin, were studied following intravenous and subcutaneous administration of single doses of 5 mg/kg to healthy sheeps, and as a long-acting poloxamer 407 gel formulation and poloxamer 407 + carboxymethylcellulose. METHODS: Plasma concentrations were determined by HPLC assay with fluorescence detection following the method described by Siefert et al. (1999). The fitting to compartmental and non compartimental pharmacokinetic methods was carried out by using WinNonlin Professional® computers programmes. The Akaike´s information criterion (AIC) (Yamaoka et al., 1978) was used to select the best equation that defines plasma concentration-time data for each animal. RESULTS: The enrofloxacin plasma concentration versus time data after intravenous and extravascular administrations could best be described by a two compartment open model.The enrofloxacin terminal half-life (t½z) was 8,11hh after intravenous administration, with a mean residence time (MRT) of 5,41 h. The apparent volumes of distribution calculated by the area method (Vz) and at steady-state (Vss) were 0,89 and 2,01 L/kg, respectively, indicating a wide body distribution. Total body clearance was 0,16 L/kg•h. The ciprofloxacin terminal half-life (t½z) was 6,83 h after intravenous administration, with a mean residence time (MRT) of 6,36 h. After extravascular administrations, terminal half-lives were 13,00, 34,80 and 38,66 h for enrofloxacin administration subcutaneously without poloxamer, with long-acting poloxamer 407 gel formulation and with poloxamer 407 + carboxymethylcellulose, respectively. MRT values obtained were 4,08, 7,58 and 7,16 h respectively. Terminal half-lives were 10,62, 7,15 and 20,61 h for ciprofloxacin metabolite, after enrofloxacin extravascular administrations, subcutaneously without poloxamer, with long-acting poloxamer 407 gel formulation and with poloxamer 407 + carboxymethylcellulose respectively. MRT values obtained were 11,90, 16,78 and 21,39 h respectively. Absolute bioavailability was104,72 % after enrofloxacin subcutaneous administration. Similar values were obtained, 82, 01 % and y 84,01 %, after enrofloxacin administration subcutaneously with long-acting poloxamer 407 gel formulation and with poloxamer 407 + carboxymethylcellulose, respectively. Minimal inhibitory concentrations (MIC) assays of enrofloxacin against different strains of Staphylococcus aureus were performed in order to compute pharmacodynamic surrogate markers. CONCLUSION: It can be concluded from this study that a dosing régimen of 15 mg/kg could be effective by subcutaneous route with polymer P407 (25%) with or without carboximetylcelulose (2%) in sheep against Staphylococcus aureus isolates with MICs  0,5 µg/mL.
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    Estudio farmacocinético de formulaciones poliméricas de liberación controlada para marbofloxacino en caprino
    (2014-02-11) Fernández-Palacios O`Connor, Rocío; Fernández Varón, Emilio; Serrano Rodríguez, Juan Manuel; Departamento de Farmacología
    OBJECTIVOS: Los objetivos de este estudio fueron: (1) establecer los perfiles concentración plasmática–tiempo y derivar los parámetros farmacocinéticos para marbofloxacino en cabras lactantes tras la administración de fomulaciones IV, SC, SC-P407 y SC-P407-CMC de marbofloxacino; (2) determinar la velocidad y cantidad de penetración de marbofloxacino, así como su eliminación, en la leche de cabra tras la administración de fomulaciones IV, SC, SC-P407 y SC-P407-CMC de marbofloxacino; (3) comparar los parámetros farmacocinéticos obtenidos entre la formulación convencional SC y las formulaciones con P407 (con y sin CMC como aditivo); (4) evaluar el grado de actividad in vitro de marbofloxacino frente a cepas de S.aureus aisladas de leche de cabra mamítica en España, y (5) calcular los marcadores surrogados de eficacia contra cepas de S.aureus aisladas de leche de cabra mamítica en España. Estos parámetros podrían proporcionar información y un entendimiento adicional sobre la farmacología de las fluoroquinolonas en pequeños rumiantes lactantes. METODOLOGÍA: Se utilizaron seis cabras hembras clínicamente sanas de la raza Murciano-Granadina, con pesos entre 49.6 - 68.4 kg en un rango de 2,5 – 3,5 años de edad. Los animales pertenecen a la granja caprina de la universidad de Murcia. A cada animal se le administró una dosis única IV o SC de marbofloxacino a la dosis de 2 mg/kg o de SC-P407 y SC-P407-CMC a la dosis de 6 mg/kg con al menos 15 días de periodo de descanso. Muestras de sangre fueron recogidas antes de inyectar el fármaco (tiempo 0 o pre-tratamiento), y a 0,083, 0,167, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 72 y 96 horas tras la administración. Muestras de leche fueron ordeñadas inmediatamente antes y después de la administración del fármaco a 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 72 y 96 horas. Este estudio fue aprobado por el comité bioético de la universidad de Murcia. Las concentraciones en plasma y leche de marbofloxacino fueron medidas mediante HPLC con detección fluorescente, y los perfiles de concentración (plasma o leche) obtenidos frente al tiempo para cada animal, en cada tratamiento, fueron analizados mediante métodos farmacocinéticos. La absorción in vivo de marbofloxacino fue evaluada mediante técnicas de deconvolución numérica. Doce cepas de Staphylococcus aureus, todas aisladas de leche de cabra con mamitis en granjas comerciales españolas fueron evaluadas. Los valores de MIC y MPC fueron obtenidos según los procedimientos recomendados por el CLSI y el método descrito por Blondeau y colaboradores, 2001. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: La semivida plasmática en la fase terminal para marbofloxacino tras la administración IV, SC, SC-P407 y SC-P407-CMC fue de 5.61, 6.89, 15.27 y 16.25 horas, respectivamente. La biodisponibilidad absoluta de marbofloxacino tras la administración de las formulaciones SC, SC-P407 y SC-P407-CMC fue de un 108.98  11.00%, 101.36  15.87% y 78.64  14.47%, respectivamente. La exposición sistémica alcanzada en cabras tras la administración de marbofloxacino en las formulaciones SC-P407 y SC-P407-CMC a la dosis de 6 mg/kg proprociona cinco puntos a considerar. Primero, la tasa de liberación del fármaco alcanzada podría ser adecuada para mantener concentraciones plasmáticas efectivas durante el intervalo de dosificación, en el caso de las formulaciones SC-P407 y SC-P407-CMC, niveles plasmáticos elevados se alcanzaron hasta las 48 horas post-administración. Segundo, estas formulaciones poseen buenos parámetros farmacocinéticos: elevadas semividas plasmáticas en la fase terminal (3 veces superiores a las formulaciones convencionales), buena biodisponibilidad, constantes de absorción bajas y elevados tiempos medios de absorción (que pueden reflejar una cinética del tipo flip-flop). Tercero, el antibacteriano utilizado en este studio posee un buen índice de penetración en leche, con perfiles plasmáticos paralelos a los obtenidos en leche. Cuarto, los resultados obtenidos con las formulaciones testadas con y sin carboxi-metilcelulosa, como aditivo, son consistentes con los marcadores surrogados predichos para obtener una ventana terapéutica efectiva contra cepas de S.aureus con valores de MIC ≤ 0.13 μg/mL. Quinto, la dosificación para alcanzar concentraciones equivalentes a la MPC podría ser efectiva para reducir la selección de subpoblaciones de bacterias mutantes de S.aureus con susceptibilidad reducida a las fluoroquinolonas. Sin embargo, son necesarios estudios adicionales para evaluar, optimizar, y conocer, las dosis y ratios óptimos necesarios para alcanzar marcadores surrogados en cabras lactantes para valores más altos de MIC o MPC y para otros agentes infecciosos. OBJECTIVES: The objectives of the present study were: (1) to establish the plasma concentration–time profile and to derive pharmacokinetics data for marbofloxacin in lactating goats after IV, SC, SC-P407 and SC-P407-CMC formulations; (2) to determine the rate and extent of marbofloxacin penetration into and elimination from milk after IV, SC, SC-P407 and SC-P407-CMC administrations; (3) to compare the pharmacokinetic parameters between conventional SC and P407 formulations (with or without CMC as an additive); (4) to evaluate the degree of in vitro activity marbofloxacin against S.aureus strains isolated from the milk of goats with clinical mastitis in Spain, and (5) to calculate the surrogate markers of efficacy against S. aureus strains isolated from mastitic goat´s milk in Spain. These parameters will provide additional understanding of fluoroquinolone pharmacokinetics in lactating small ruminants. METHODOLOGY: Six clinically healthy Murciano-Granadina female goats weighing between 49.6 - 68.4 kg and aged from 2.5 - 3.5 years from the Caprine Farm of the University of Murcia were used. Each animal received either a single IV or SC injection of marbofloxacin at a dose of 2 mg/kg or a SC-P407 and SC-P407-CMC administration at a dose of 6 mg/kg with at least a 15-day washout period. Blood samples were collected at 0 (pre-treatment), 0.083, 0.167, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 72 and 96 h post-dosing. Milk samples were collected immediately before dosing on the day of treatment administration (time 0) and at 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 72 and 96 h after administration. The study was approved by the Bioethics Committee of the University of Murcia. Plasma and milk concentrations of marbofloxacin were measured by HPLC method with fluorescence detection, and the plasma and milk concentration-time data obtained in each individual animal were analyzed by pharmacokinetics methods. The in vivo marbofloxacin absorption was performed by numeric deconvolution. Twelve strains of Staphylococcus aureus, all isolated from mastitic goat´s milk in Spain, were tested. The MIC and MPC of marbofloxacin was determined using the recommended procedure by CLSI and the method described by Blondeau et al. 2001. RESULTS AND CONCLUSIONS: Plasma terminal half-lives of marbofloxacin after IV, SC, SC-P407 and SC-P407-CMC administration were 5.61, 6.89, 15.27 and 16.25 h respectively. Following SC, SC-P407 and SC-P407-CMC administration of marbofloxacin, the absolute bioavailability was 108.98  11.00%, 101.36  15.87% and 78.64  14.47%, respectively. The systemic exposure achieved in goats following the SC-P407 and SC-P407-CMC administration of marbofloxacin at a 6 mg/kg dose provides five important outcomes. First, the rate of drug release could be adequate to maintain effective plasma concentrations for the duration of the dosage interval, in the case of SC-P407 and SC-P407-CMC formulations, high plasma levels are achieved until 48 hours. Second, these formulations provide good pharmacokinetics parameters: high terminal half-lives (3-fold than the conventional formulation), good bioavailability, slow absortion rate constants and highs mean absortion times (that can reflect flip-flop kinetics). Third, the antibacterial drug used in this study allowed a good penetration in milk, with a concentration-time profile in milk closely paralleled the plasma profile, fourth, results for the formulations tested with or without carboxy-methylcellulose as additive are consistent with the predicted surrogate markers needed for a positive therapeutic outcome for the S.aureus strains tested with MIC ≤ 0.13 μg/mL. Fifth, dosing to achieve MPC concentrations could be effective to reduce the selection of bacterial subpopulations of S.aureus with reduced fluoroquinolone susceptibility. However, further studies are necessary to evaluate, optimize and to know the doses and optimal ratios of the surrogate markers in lactating goats for MIC or MPC values higher and for other infectious agents.
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    Estudio farmacocinético de formulaciones poliméricas de liberación controlada y excreción en leche de ceftiofur en caprino
    (2016-05-02) Cárceles García, Carlos Mario; Fernández Varón, Emilio; Facultad de Medicina
    OBJETIVOS: Se ha estudiado el comportamiento farmacocinético de ceftiofur en cabras lactantes tras la administración por las vías intravenosa y subcutánea (SC1) de una dosis de 2 mg/kg, y tras la administración del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2% por vía subcutánea (SC2) a la dosis de 6 mg/kg. METODOLOGÍA: La determinación de ceftiofur en plasma y leche se realizó mediante HPLC con detección ultravioleta. Se realizó un ajuste a métodos farmacocinéticos compartimentales y no compartimentales. Ceftiofur se distribuye según un modelo bicompartimental abierto, tanto por vía intravenosa como por vía subcutánea en los dos casos. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: No se obtuvieron concentraciones de ceftiofur en leche por encima del límite de cuantificación de la técnica en ninguna de las tres vías estudiadas. Tras la administración intravenosa, la vida media obtenida para el ceftiofur (t1/2λz) fue de 4,21 h con un tiempo medio de residencia (MRT) de 4,27 h. Los volúmenes de distribución calculados en estado estacionario (Vss) y en función del área bajo la curva (Vz) resultaron ser de 0,18 L/kg y 0,31 L/kg respectivamente, indicando una limitada pero buena distribución orgánica. En cuanto al aclaramiento plasmático (Cl), éste alcanzó un valor de 0,007 L/kg/h. La formulación convencional por vía subcutánea, así como la formulación de liberación controlada (en solución del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2%), nos permitieron registrar los siguientes tiempos de semivida: 5,1 h y 41,13 h, respectivamente, con unos valores de MRT de 6,29 h y 25,11 h, respectivamente. La biodisponibilidad de ceftiofur en la formulación convencional alcanzó un valor de 85,16%. Valores similares se obtuvieron cuando se administró por vía subcutánea en solución del polímero P407 al 25% + carboximetilcelulosa al 2%, que fue del 84,43%. La absorción in vivo de ceftiofur desde las formulaciones convencional y de liberación controlada fue evaluada mediante deconvolución numérica y métodos no compartimentales. En el caso de la deconvolución numérica, las velocidades de absorción calculadas para las formulaciones SC1 y SC2 fueron de 56,64 ± 24,27 mg/h a 0,64 ± 0,26 h y 29,30 ± 5,10 mg/h a 1,92 ± 0,32 h, respectivamente. Mediante la aproximación no compartimental sólo se obtuvieron valores de MAT superiores al MRTIV (4,27 h) para las formulación SC2 (20,84 h). Estos resultados indican que las diferencias en las velocidades de elminación y en los tiempos medios de residencia pueden ser debidas a diferencias en los procesos de absorción. Se determinaron las concentraciones mínimas inhibitorias (MIC), la concentración preventiva de mutantes (MPC), el índice de prevención de mutantes (MPI) y la ventana de selección de mutantes para ceftiofur frente a cepas de Mannheimia haemolytica a fin de determinar los índices farmacocinético-farmacodinámicos óptimos. También se realizó un análisis del efecto in vitro y ex vivo sobre las mismas cepas. El análisis de los resultados muestra que la formulación de liberación controlada SC2 ante un régimen de dosis múltiples mostraría eficacia durante al menos 72 horas. Esto queda reforzado al analizar el efecto in vitro y ex vivo sobre las cepas de Mannheimia haemolytica que confirma por un lado el carácter tiempo dependiente de ceftiofur, con unas características especialmente favorables para la formulación polimérica SC2 al alargar el decrecimiento bacteriano hasta las 72 horas. SUMMARY OBJECTIVES: The pharmacokinetics of ceftiofur was studied following intravenous and subcutaneous (SC1) administration of single doses of 2 mg/kg to healthy goats, and as a long-acting poloxamer 407 gel formulation and poloxamer 407 + carboxymethylcellulose (SC2) of 6 mg/kg. METHODS: Plasma concentrations were determined by HPLC assay with ultraviolet detection. Data were fitted to compartmental and non compartimental pharmacokinetic methods. The ceftiofur plasma concentration versus time data after intravenous and extravascular administrations could best be described by a two compartment open model. RESULTS AND CONCLUSIONS: The ceftiofur terminal half-life (t½z) was 4,21 h after intravenous administration, with a mean residence time (MRT) of 4,27 h. The apparent volumes of distribution calculated at steady-state (Vss) and by the area method (Vz) were 0,18 and 0,31 L/kg, respectively, indicating a wide body distribution. Total body clearance was 0,007 L/kg/h. After extravascular administrations, terminal half-lives were 5,10 and 41,12 h for ceftiofur administration subcutaneously for conventional formulation and for long-acting poloxamer 407 + carboxymethylcellulose, respectively. MRT values obtained were 6,29 and 25,11 h respectively. Absolute bioavailability was 85,16% after ceftiofur subcutaneous administration of conventional formulation. Similar value was obtained, 84,43 %, after ceftiofur administration subcutaneously with long-acting poloxamer 407 + carboxymethylcellulose. The in vivo ceftiofur absorption rate from conventional and poloxamer formulation was estimated by non-compartmental method and numeric deconvolution. In the case of numeric deconvolution, the calculated absorption rates and the cumulative absorption in terms of fraction input SC1 and SC2 formulations were 56,64 ± 24,27 mg/h at 0,64 ± 0,26 h and 29,30 ± 5,10 mg/h at 1,92 ± 0,32 h, respectively. From non-compartmental approach, only the MAT values for SC2 (20,84 h) was higher than MRTIV (4,27 h). These results show that the differences on elimination rate constants and mean residence times between conventional SC1 and long-acting SC2 formulations must be due to differences on the absorption process. Minimal inhibitory concentrations (MIC) assays of ceftiofur against different strains of Mannheimia haemolytica were performed in order to compute pharmacodynamic surrogate markers. In vitro and ex vivo analysis were performed over the same strains. From these data, it is concluded that in a multiple dose regimen of ceftiofur for the SC2 formulation, efficacy would prolonge longer than 72 h. This conclusion has been inforced by the in vitro and ex vivo analysis showing the time-dependent profile of ceftiofur, and also showing a growth decay of bacteria until at least 72 h.
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    Estudio farmacocinético y excreción en leche de cefquinome en ovino
    (2015-07-03) Selvi Sabater, Pablo; Cárceles Rodríguez, Carlos; Facultad de Veterinaria
    El objetivo del presente estudio fue evaluar la farmacocinética de cefquinoma en ovejas, administrándola por distintas vías y, por otra parte, determinar las concentraciones mínimas inhibitorias de este antimicrobiano frente a Staphylococcus aureus. El estudio se ha realizado en 5 ovejas, todas ellas sanas y adultas, con pesos que oscilaban entre 61 y 93 Kg, una edad entre 2,5 y 3,5 años y de la raza Lacaune. Las vías de administración y dosis han sido la vía intravenosa, intramuscular y subcutánea a la dosis de 2 mg/kg. La determinación de cefquinoma en plasma se realizó por cromatografía líquida de alta resolución con detección por fluorescencia. El ajuste a modelos farmacocinéticos compartimentales y la determinación de los parámetros no compartimentales se realizó mediante el programa farmacocinético WinNonlin Professional® (Versión 5.2.1). El tratamiento estadístico de los datos se ha realizado con el programa SPSS 19.0. Las diferencias consideradas estadísticamente significativas son aquellas cuya P es menor de 0,05. Los resultados obtenidos tras la administración intravenosa muestran que cefquinoma se distribuye según un modelo bicompartimental abierto, a diferencia de lo que ocurre con la administración por vía intramuscular y subcutánea, en las que muestra que se distribuye según un modelo monocompartimental. Cuando se administró el cefquinoma vía intravenosa, intramuscular y subcutánea se registraron los siguientes tiempos de vida media: 1,75±0,42, 1,37±0.16 y 1,84 ± 0,19 h, respectivamente.. Los valores de MRT obtenidos han sido 1,86±0,21, 2,64±0,17 Y 5,20±0,31 h, respectivamente. Se observa cómo la permanencia del fármaco es mayor tras la administración extravascular, especialmente en la vía subcutánea. Sin embargo, los valores de AUC obtenidos han sido 11861±1466, 9247±773 y 6959±967 μg×h/L. La biodisponibilidad de cefquinoma es menor cuando se administra dicho antibiótico por vía subcutánea (60%), respecto a la vía intramuscular (79,5%). Cefquinoma administrado por vía intravenosa, intramuscular y subcutánea no superó una excreción en leche superior al 0,05% en ninguna de las 3 vías. El parámetro farmacocinético-farmacodinámico que se correlaciona con mayor frecuencia con el éxito clínico es el porcentaje de tiempo por encima de la CMI (Toutain y cols, 2002; Mckellar y cols, 2004). Se ha determinado la sensibilidad a cefquinoma frente a doce cepas de Staphylococcus aureus obtenidas de ovejas en granjas comerciales. Como cepas de referencia se utilizaron Staphylococcus aureus ATCC 29213 y Escherichia coli ATCC 25922. De las doce cepas estudiadas frente a cefquinoma, todas presentaron una CMI entre un rango de concentraciones de 0,50 mg/L y 0,125 mg/L. Se establece, por tanto, como CMI90, un valor de 0,5 mg/L para cefquinoma. Las cepas de referencia han presentado un valor de CMI de 0, 25 mg/L para Staphylococcus aureus ATCC 29213 y de 0,25 mg/L para Escherichia coli ATCC 25922. Tras la administración de cefquinoma por vía intravenosa e intramuscular se encuentran concentraciones superiores a 0,5mg/L hasta las 4 horas. Mientras que, tras la administración por vía subcutánea, hasta las 6 horas. Con una administración diaria por vía intravenosa e intramuscular, únicamente habría concentraciones por encima de la CMI en un 17% (IM) y un 25% (SC). Para que este porcentaje se encuentre por encima del 50%, sería necesario administrar el fármaco cada 8 horas para la vía intravenosa e intramuscular (66%) y cada 12 horas (50%) para la vía subcutánea. De dicho estudio se puede concluir que una dosis de 2mg/kg de cefquinoma diaria no permite alcanzar valores de tiempo por encima de la CMI en ninguna de las tres vías. Además, la única vía que permite administraciones con porcentajes de tiempo por encima del 50% administrándose cada 12 h es la vía subcutánea. SUMMARY Our objective was to evaluate the pharmacokinetics of cefquinome in sheep, by its administration on different routes and, on the other hand, to determine the minimum inhibitory concentrations of this antibiotic against Staphylococcus aureus, as it is responsible for several infections. Research has been conducted on five sheep –Lacaune breed–, all of them healthy and adult, with weights ranging between 61 and 93 Kg, and with an age between 2,5 and 3,5 years. Administration routes are intravenous (IV), intramuscular (IM) and subcutaneous (SC), with a dose of 2 mg / kg. Determination of cefquinome in plasma was performed by high performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection. The adjustment to compartmental pharmacokinetic models and the determination of non-compartmental parameters was realized using the pharmacokinetic program WinNonlin Professional® (Version 5.2.1). The statistical treatment of the data was performed with the SPSS 19.0 program. Differences considered statistically significant are those in which p is less than 0.05. The results obtained after intravenous administration show that cefquinome is distributed according to a two-compartment open model, as opposed to what happens with intramuscular and subcutaneous administration, in which cefquinome is distributed according to a one-compartment model. When the Cefquinome was administered by intravenous, intramuscular and subcutaneous injection the following half-lives were recorded: 1.75±0.42, 1.37±0.16 and 1.84 ± 0.19 h, respectively. MRT values obtained were 1.86±0.21, 2.64±0.17 and 5.20±0.31 h, respectively. It is observed that the permanence of the drug is greater after the extravascular administration, especially subcutaneous. Nevertheless, AUC levels obtained were 11861±1466, 9247±773 and 6959±967 g×h/L. The bioavailability of cefquinome is lower when the antibiotic is administered subcutaneously (60%) compared to the intramuscular route (79.5%). Cefquinome administered by intravenous, intramuscular and subcutaneous routes did not exceed in any case a milk excretion higher than 0.05%. The pharmacokinetic-pharmacodynamic parameter that most frequently correlates with clinical success is the percentage of time above MIC (Toutain et al, 2002, Mckellar et al, 2004). Cefquinome sensitivity has been investigated in twelve Staphylococcus aureus strains obtained from commercial sheep farms. As reference strains, Staphylococcus aureus ATCC 29213 and Escherichia coli ATCC 25922 were used. Of the twelve strains tested against cefquinome, all had an MIC range of concentrations between 0.50 mg/L and 0.125 mg/L. Therefore, it is established for MIC90 a value of 0.5 mg / L for Cefquinome. Reference strains show a MIC level of 0, 25 mg / L for Staphylococcus aureus ATCC 29213 and 0.25 mg / L for Escherichia coli ATCC 25922. After the cefquinome administration by intravenous and intramuscular routes, concentrations above 0.5 mg/L are obtained until 4 hours, whereas, after subcutaneous administration, this concentration remained until 6 hours. This, expressed as a percentage, means that with a daily intravenous and intramuscular administration, there would be only concentrations above the MIC for 17% (IM) and 25% (SC). With the aim of this percentage to be above 50%, the minimum percentage considered optimal, it is necessary to administer the drug every 8 hours, for intravenous and intramuscular routes (66%), and every 12 hours (50%) for the subcutaneous route. From this study it can be concluded that a dose of 2mg / kg daily Cefquinome does not achieve values of time above the MIC in any of the three routes. Furthermore, the only route that allows administrations with time percentages above 50%, and being administered every 12 hours, is the subcutaneous route.
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    Validación de métodos analíticos por cromatografía líquida alta resolución (HPLC) para la cuantificación de cefuroxima, delafloxacino y tilvalosina en muestras biológicas
    (Universidad de Murcia, 2022-07-28) Hernandis Belenguer, Verónica; Escudero Pastor, Elisa; Marín Carrillo, Pedro; Escuela Internacional de Doctorado
    El uso de antibióticos tanto en medicina humana como en medicina veterinaria se está restringiendo en la actualidad debido a la elevada resistencia que ofrecen los microorganismos. Los estudios farmacocinéticos constituyen una herramienta muy valiosa a la hora de evaluar la concentración de fármaco en el organismo y establecer posologías adecuadas que aseguren el éxito clínico y minimicen el riesgo de aparición de resistencias bacterianas. Para poder realizar dichos estudios en muestras biológicas, tanto de humanos como de animales, es necesario previamente desarrollar y validar un método analítico para cuantificar las concentraciones del fármaco en la muestra de forma adecuada. En general, los métodos analíticos más usados en los estudios farmacocinéticos para la cuantificación del fármaco son los métodos cromatográficos. En este caso, el objetivo general de la presente tesis doctoral fue la validación de tres métodos analíticos para la cuantificación de tres antibióticos (cefuroxima, delafloxacino, tilvalosina) que permita la obtención de la concentración exacta del fármaco en diferentes matrices biológicas y de este modo utilizarlos para realizar los estudios farmacocinéticos pertinentes. El desarrollo, optimización y validación de un método analítico para la cuantificación de la cefuroxima se realizó en plasma humano mediante HPLC/UV. La extracción se realizó mediante precipitación de proteínas con metanol/TFA (ácido trifluoroacético). Los resultados obtenidos en los parámetros de validación fueron satisfactorios obteniendo una elevada recuperación (93.52 %,), alta selectividad y especificidad, con un valor en el error de la exactitud por debajo del 10 %. De igual forma, para el cálculo de la precisión se obtuvo un valor ˂ 10 % en el coeficiente de variación. Los límites de detección y cuantificación se establecieron en 0.1 y 0.25 µg/mL, respectivamente. Por lo que el método analítico propuesto es adecuado para ser aplicado en estudios clínicos, análisis de rutina y estudios farmacocinéticos. El desarrollo, optimización y validación de un método analítico para la cuantificación de delafloxacino se realizó en plasma humano mediante HPLC/FL. El proceso de extracción consistió en una extracción líquido-líquido con ácido fórmico al 50% y acetato de etilo. También se evaluó la estabilidad de dicho antibiótico en diferentes matrices y a diferentes temperaturas. Los resultados obtenidos en los parámetros de validación fueron satisfactorios obteniendo una elevada recuperación (98.3 %), alta selectividad y especificidad, un límite de detección de 0.05 µg/mL y un límite de cuantificación de 0.1 µg/mL. Los valores obtenidos en la precisión, expresados como coeficiente de variación, fueron ˂ 11%. De igual forma, los valores obtenidos para el error en la exactitud fueron ˂ 11%. Los resultados obtenidos en los estudios de estabilidad mostraron inestabilidad tanto en las muestras de plasma como en las disoluciones madre a partir de los quince días de almacenamiento a -40ºC. De ahí que se propongan nuevos estudios con el fin de asegurar la estabilidad del delafloxacino en diferentes condiciones de almacenamiento. El desarrollo, optimización y validación de un método analítico para la cuantificación de la tilvalosina se realizó en plasma de cerdo mediante HPLC/UV. La extracción se realizó mediante precipitación de proteínas con una solución al 0.1 % de ácido fórmico en acetonitrilo. También se evaluó la estabilidad de dicho antibiótico en diferentes matrices y a diferentes temperaturas. Los resultados obtenidos en los parámetros de validación fueron excelentes, obteniendo un rango en el valor de recuperación entre 89.66-96.92 %. Los límites de detección y cuantificación fueron de 0.05 μg/mL y 0.1 μg/mL, respectivamente. Con lo que respecta a los valores obtenidos para la precisión y el error en la exactitud, éstos fueron ˂ 13.0 % en ambos parámetros. Hay que destacar la buena selectividad y especificidad del método analítico. Finalmente, los resultados obtenidos en los estudios de estabilidad a -40ºC fueron también satisfactorios demostrando la estabilidad a corto y largo plazo. Por lo que se puede concluir que este método puede ser aplicado en estudios clínicos, monitorización de niveles eficaces y estudios farmacocinético.