Browsing by Subject "Enfermedades infecciosas en veterinaria"

Now showing 1 - 6 of 6
  • Thumbnail Image
    Publication
    Open Access
    Circovirus porcino 2 y Mycoplasma hyopneumoniae : estudios de seguridad y eficacia vacunal, y adaptacióde futuras reproductoras
    (Universidad de Murcia, 2020-10-06) Figueras Gourgues, Sebastián; García Vázquez, Francisco Alberto; Hernández Caravaca, Iván; Escuela Internacional de Doctorado
    El objetivo principal de la presente Tesis Doctoral fue el estudio integral de la eficacia y la seguridad de las vacunas de Circovirus porcino 2 (PCV-2) y Mycoplasma Hyopneumoniae (Mhyo), así como la correcta adaptación a Mhyo de las futuras reproductoras, demostrando su influencia en los parámetros productivos y de bienestar del ganado porcino. Para la consecución de este objetivo general el estudio se dividió en diferentes objetivos específicos distribuidos en 3 capítulos. El objetivo del capítulo 1 fue analizar el efecto de los niveles de anticuerpos de origen maternal (AOM) de PCV-2 sobre la eficacia de la vacuna en lechones vacunados a las tres semanas de edad con una vacuna comercial. Se vacunaron lechones al destete con diferentes niveles de AOM y se compararon con lechones no vacunados. Los resultados mostraron que el uso de la vacuna fue capaz de disminuir la viremia de PCV-2, mejorar la ganancia media diaria y reducir la mortalidad en los lechones vacunados en comparación con los no vacunados independientemente del nivel de AOM presentes en el momento de la vacunación. Los resultados del estudio demostraron que la inmunidad maternal contra PCV-2 transferida a través de la ingesta de calostro tiene un efecto protector contra esta infección viral. La vacuna utilizada fue efectiva cuando se aplicó a las tres semanas de edad y no se vio afectada por el nivel de AOM. Para controlar la Neumonía Enzoótica Porcina el objetivo ha de ser el de vacunar lechones con una mínima colonización pulmonar de Mhyo. En el capítulo 2 se evaluó el uso de la tecnología de la nebulización (Neb) para una exposición eficaz a Mhyo en cerdas nulíparas en condiciones de campo. La fase I consistió en comparar la exposición a la bacteria vía intratraqueal (IT) o mediante Neb. Se tomaron muestras de raspados traqueobronquiales (TBS) después de la exposición para evaluar el éxito de la infección. No se observaron diferencias estadísticamente significativas en la proporción de muestras de TBS positivas ni en la carga bacteriana entre los lotes expuestos por IT o por Neb. En la fase II, otros tres lotes de hembras fueron expuestos a Mhyo mediante Neb, resultando todas las muestras de TBS positivas. La información generada en esta investigación consolida el uso de la nebulización como un método fiable de exposición a Mhyo en condiciones de campo, como una estrategia para la aclimatación de cerdas nulíparas antes de ingresar como hembras reproductoras. En el control de las enfermedades por estos patógenos es importante que las vacunas sean lo más seguras posible para los animales. En el capítulo 3, el objetivo del estudio fue comparar la seguridad de diferentes protocolos de vacunación utilizados contra el PCV-2 y Mhyo, estudiando dos proteínas de fase aguda, la haptoglobina (Hp) y la proteína C reactiva (CRP), y cambios en la temperatura rectal (TR). Además, se analizó la posible influencia del día de vacunación y la raza. En un primer experimento, se vacunaron lechones comerciales el día del destete con dos protocolos diferentes. En un segundo experimento, se vacunaron lechones comerciales e ibéricos a los 7 días después del destete también con dos protocolos diferentes en cada granja. Se tomaron muestras de sangre y TR antes y después de la vacunación. Las vacunas que produjeron mayores aumentos en TR también produjeron mayores incrementos en las PFA. No se encontró influencia del día de la vacunación o de la raza. Las concentraciones séricas de las PFA diferían según la vacuna utilizada, lo que puede ser útil, junto con la TR, para elegir la vacuna o protocolo que produce una respuesta de fase aguda de menor magnitud.
  • Thumbnail Image
    Publication
    Open Access
    Estudios in vivo e in vitro sobre algunos aspectos de la respueta inmunitaria innata frente al virus PRRS= In vivo and in vitro studies on some aspects of the innate immune response against PRRSV
    (2014-09-08) García Nicolás, Obdulio; Pallarés Martínez, Francisco José; Ramis Vidal, Manuel Guillermo; Quereda Torres, Juan José; Facultad de Veterinaria
    Objetivos. Primero: determinación de la susceptibilidad de macrófagos derivados de monocitos activados por citocinas a ser infectados por diferentes cepas del genotipo 1 y 2 de PRRSV. Segundo: evaluación de la modulación de la respuesta inmune por la cepa 2982 de PRRSV-1 en pulmón, tonsila y nódulos linfáticos de credos infectados. Tercero: caracterización de la respuesta inmune inducida por diferentes cepas de PRRSV-1 que varían en virulencia en distintos compartimentos de nódulo linfático mediastínico (Med-LN) de cerdos infectados. Metodología. En el experimento in vitro se seleccionaron monocitos de PBMC de cerdos SPF y se incubaron durante 72 h para permitir la diferenciación en macrófagos. Entonces esas células se estimularon con citocinas durante 24 h: IFN-γ (M1), IL-4 (M2), IFN-β o no estimulados. Después mediante citometría de flujo se evaluó el fenotipo de los diferentes macrófagos (CD16, MHC I, MHC II, CD86, CD16 and CD14). La infección de macrófagos por PRRSV se cuantificó por medición de la nucleocápside mediante citometría de flujo. En el sobrenadante se midió por ELISA IFN-α, TNF-α, and IL-10. Para el primer estudio in vivo 28 cerdos SPF se infectaron intramuscularmente con la cepa 2982 de PRRSV-1 y se eutanasiaron humanitariamente a 3, 7, 10, 14, 17, 21 y 24 dpi. Se dejaron 4 animales como grupo control negativo, que se eutanasiaron a los 24 dpi. Los niveles de transcripción de citocinas proinflamatorias (IFN-α, IFN-γ, IL-12p35, IL-12p40 y TNF-α) e inmunododuladoras (IL-10 y TGF-β) se midieron mediante RT-qPCR. Para el segundo experimento in vivo 76 lechones SPF fueron aleatoriamente agrupados en 3 grupos de 20 animales para la infección, y los restantes 16 se dejaron como control. Se utilizaron tres cepas de PRRSV-1 con distinta virulencia: LV como prototipo, 215-06 del subtipo 3, y la SU1-bel del subtipo 3. Los animales se eutanasiaron humanitariamente a los 3, 7 y 35 dpi. El folículo y área inter-folicular de Med-LN se tomaron separadamente mediante captura por microdisección láser. Los niveles de transcripción de citocinas (IFN-α, IFN-γ, TNF-α, IL-23p19, IL-10 and TGF-β) y de SOCS1 se evaluaron por RT-qPCR. Las poblaciones celulares de Med-LN se evaluaron por inmunohistoquímica. Resultados. Los macrófagos estimulados por citocinas desarrollan diferente fenotipo comparado con macrófagos no polarizados. Los cultivos celulares de macrófagos polarizados por citocinas pueden muestran diferencias importantes entre cepas de PRRSV. Mientras que los macrófagos no polarizados y M2 son sensibles a todas las cepas de PRRSV, el tratamiento de macrófagos con IFNs induce un claro estado antivírico en dichas células con una menor infección y replicación de PRRSV. Sólo los M1 infectados con LVP23 produjeron cierta cantidad de IFN-α. Este tipo de macrófagos representan un flexible modelo in vitro alternativo al empleo de líneas celulares derivadas de mono o a macrófagos alveolares porcinos. El primer estudio in vivo mostró que la cepa 2982 del PRRSV-1 es capaz de evadir el establecimiento de respuesta inmune innata efectiva, permitiendo una expresión génica de IFN- α 1 y TNF-α disminuida, y una respuesta inmune adquirida débil y retardada, por una expresión ineficiente de IL-12 e IFN-γ. El segundo experimento in vivo demostró que PRRSV permanece alojado en Med-LN al menos hasta 35 dpi, y la cepa SU1-bel es la que posee una mayor capacidad de replicación. Las cepas de PRRSV-1 evitaron el establecimiento correcto de la respuesta inmune en cerdos infectados mediante la depleción de células linfáticas y disminución de la expresión de IFN- α y TNF-α en los compartimentos de Med-LN. Finalmente, los resultados sugieren que la inducción de IL-10 por PRRSV con el propósito de retrasar la respuesta inmune del hospedador no es una estrategia común a todos los aislados de PRRSV-1. Objectives. First: determination of the cytokine primed monocyte-derived macrophages susceptibility to be infected by different PRRSV-1 and 2 strains. Second: evaluation of the swine immune response modulation by PRRSV-1 2982 strain in lung, tonsil, tracheobronchial and retropharyngeal lymph nodes of infected pigs. Third: characterization of the immune response induced by several PRRSV-1 strains varying in virulence in distinct compartments of mediastinal lymph node (Med-LN) (follicle and inter-follicular areas) of infected pigs. Methodology. For the in vitro experiment, monocytes were isolated from PBMC of SPF pigs and incubated during 72 h to lead the macrophage differentiation. Then, these cells were stimulated during 24 h with cytokines: IFN-γ (M1), IL-4 (M2), IFN-β or no stimulated. After that the phenotype of the different macrophages were evaluated by flow cytometry (CD16, MHC I, MHC II, CD86, CD16 and CD14). Several PRRSV-1 and PRRSV-2 strains were used to infect macrophages. PRRSV infection of macrophages was evaluated by nucleocapsid protein acquisition by flow cytometry. In the supernatant IFN-α, TNF-α, and IL-10 were determined by ELISA. For the first in vivo experiment 28 SPF pigs were infected intramuscularly with PRRSV-1 2982 isolate and were humanely euthanized at 3, 7, 10, 14, 17, 21 and 24 dpi. Four pigs were kept as non-infected control group, being humanely euthanized at 24 dpi. The proinflammatory (IFN-α, IFN-γ, IL-12p35, IL-12p40 and TNF-α) and immunomodulatory (IL-10 and TGF-β) cytokines transcript levels were evaluated by means of RT-qPCR. For the second in vivo experiment, 76 SPF piglets were ramdonly allocated in groups of 20 animals for the viral infection and the 16 remaining animals as control group. Three PRRSV-1 isolates varying in virulence were selected in this study: LV as prototype, 215-06 from subtype 1, and SU1-bel from subtype 3. Animals were humanely euthanized at 3, 7 and 35 dpi. Med-LN follicle and inter-follicular areas were separately selected by Laser Microdissection Capture. Cytokines (IFN-α, IFN-γ, TNF-α, IL-23p19, IL-10 and TGF-β) and SOCS1 transcript levels were evaluated by means of RT-qPCR. The lymph node cell populations were evaluated by immunohistochemistry. Results. The in vitro experiment showed that stimulated macrophages developed different phenotype compared with non polarized macrophages. Cytokine-primed macrophages cultures can reveal important PRRSV strain differences. Whereas undifferentiated macrophages and M2 are sensitive to all PRRSV strains, IFN-γ and IFN-β treatment of macrophages induced a clear antiviral state in macrophages with reductions in virus infection and replication. Only IFN-α production was detected in the supernatant of M1 infected with LVP23 PRRSV-1 strain. These macrophages represent a flexible in vitro model alternative against monkey cell lines and porcine alveolar macrophages. The first in vivo experiment showed that PRRSV-1 strain 2982 is able to evade the onset of an effective innate immune response, leading to an impaired expression of IFN-α 1 and TNF-α gene expression, and a weak and delayed acquired immune response through an inefficient IL-12 and IFN-γ expression. This experiment showed that PRRSV remains allocated in follicle of lymph node during at least 35 dpi, and SU1-bel showed the higher ability of replication. PRRSV-1 stains showed to avoid the correct innate immune response in infected pigs through lymphatic cell depletion, IFN-α and TNF-α down-regulation in Med-LN compartments. Finally, the IL-10 induction by PRRSV was not a common strategy among the PRRSV-1 to delay of the host immune response.
  • Thumbnail Image
    Publication
    Metadata only
  • Thumbnail Image
    Publication
    Open Access
    Implicación del semental caprino en la agalaxia contagiosa : epidemiología descriptiva y molecular
    (2015-05-22) Gómez Martín, Ángel; Fé Rodríguez, David Christian de la; Corrales Romero, Juan Carlos; Facultad de Veterinaria
    La agalaxia contagiosa caprina (AC) es una de las enfermedades con mayores repercusiones socioeconómicas del sector de los pequeños rumiantes. Los avances en el conocimiento de la epidemiología molecular y analítica de la enfermedad, así como los aspectos más relevantes que habrán de ser estudiados en un futuro, fueron abordados en una revisión por invitación en la revista The Veterinary Journal (Estudio 1). No obstante, esta Tesis Doctoral se ha centrado en estudiar las implicaciones epidemiológicas del semental caprino en la AC. Dentro de este ámbito de estudio, se ha evaluado la posible distribución sistémica de Mycoplasma spp. en sementales portadores auriculares asintomáticos mediante el estudio microbiológico y molecular (PCR) (Estudio 2). Por otra parte, ante el riesgo que suponía para los centros de inseminación la entrada de sementales infectados, se hizo necesario implantar estrategias de prevención y vigilancia en los mismos que contemplaran la identificación de portadores asintomáticos. Este modelo fue basado en el muestreo tanto de animales candidatos a entrar en los centros como de aquellos presentes en los mismos (Estudio 3). El alto valor genético de algunos sementales caprinos infectados, motivó el desarrollo de otra experiencia evaluando la eficacia del tratamiento antibiótico con marbofloxacina, uno de los antibióticos con mayor eficacia in vitro. Además, también fueron consideradas las posibles repercusiones que este tratamiento podría tener sobre la calidad espermática de los sementales afectados (Estudio 4). Finalmente, se evaluó la supervivencia de los principales agentes etiológicos de la AC en la dosis seminal. Previamente, fue necesario se desarrollar un modelo de contaminación experimental que permitiera obtener resultados válidos y extrapolables a las condiciones de campo (Artículo 5). Gracias a ello, se pudo posteriormente desarrollar un estudio experimental para evaluar la supervivencia de estas especies de micoplasmas en semen diluido y eyaculados, así como su repercusión sobre la calidad espermática (Estudio 6). OBJETIVOS PRIMERO: Realizar una revisión bibliográfica en donde se planteen estrategias de futuro en la investigación de la AC. SEGUNDO: Estudiar la distribución de Mycoplasma spp. en sementales caprinos portadores auriculares asintomáticos. TERCERO: Desarrollar un programa de prevención y vigilancia de AC en centros de inseminación artificial. CUARTO: Estudiar la eficacia del tratamiento sistémico de sementales portadores y sus repercusiones sobre la calidad espermática. QUINTO: Desarrollar un modelo experimental para la contaminación de semen caprino con Mycoplasma spp. SEXTO: Evaluar la viabilidad de Mycoplasma agalactiae (Ma) y Mycoplasma mycoides subsp. capri (Mmc) en semen diluido así como sus repercusiones en la calidad espermática. CONCLUSIONES PRIMERA Se confirma la distribución sistémica de Ma y Mmc en sementales caprinos portadores auriculares asintomáticos. SEGUNDA La presencia de Ma y Mmc en el sistema respiratorio, digestivo y urogenital de portadores asintomáticos puede suponer un factor de riesgo para la transmisión de la AC mediante las secreciones procedentes de estas localizaciones. TERCERA Se ha determinado por primera vez la presencia de Mmc en semen caprino de sementales asintomáticos infectados de forma natural. CUARTA El análisis combinado de hisopos de conducto auditivo externo y muestras de semen para el diagnóstico de micoplasmas asociados a la AC, resulta una herramienta útil para controlar la presencia de sementales caprinos portadores asintomáticos. QUINTA Además de afectar a la calidad espermática, el tratamiento sistémico con marbobloxacina resulta ineficaz para eliminar las infecciones por Mmc del conducto auditivo externo de sementales caprinos infectados de forma natural. SEXTA La supervivencia a dosis infectivas de Ma y Mmc en semen diluido durante al menos 150 minutos supone un factor de riesgo para su transmisión venérea. SEPTIMA En las condiciones estudiadas, el semen diluido disminuye la viabilidad de Ma mientras que el eyaculado la incrementa, sugiriendo que la monta natural puede incrementar las posibilidades de transmisión venérea de la agalaxia contagiosa caprina respecto al uso de la inseminación artificial. SUMMARY: Recent published studies on the contagious agalactia (CA) and especially the advances in the knowledge of their molecular epidemiology and analytical as well as the most relevant aspects that are to be studied in the future were discussed in the review by invitation asked us magazine The Veterinary Journal (Study 1). The doctoral thesis has mainly focused on studying the epidemiological implications of bucks on the CA. Within this field of study has evaluated first the distribution of the organism in ear asymptomatic carrier bucks in order to determine the existence of possible systemic infections. All these questions were developed in a second wok, by microbiological and molecular (PCR) study of naturally infected stallions (Study 2). Moreover was necessary to implement prevention strategies and monitoring them to contemplate the identification of asymptomatic carriers in insemination centers (Study 3). This model is based on sampling animals both candidates to enter the centers as those present in them. The high genetic value of some of the bucks infected, motivated the development of another experience evaluating the effectiveness of the use of antibiotic treatment with marbofloxacin for ear asymptomatic carriers bucks. In addition, were also considered the potential impact that this treatment might have on sperm quality of stallions affected (Study 4). http://www.google.com/url?source=transpromo&rs=rssf&q=//translate.google.com/community?source=all Finally, the survival of the major etiological agents of CA, Mycoplasma agalactiae (Ma) and Mycoplasma mycoides subsp capri (Mmc) was evaluated in the diluted semen. Previously it was necessary to develop a model of experimental contamination which to obtain valid and extrapolated to field conditions results (Article 5). This model allowed subsequently developing a experimental study to evaluate the survival of these species of mycoplasmas in diluted semen and ejaculate, and their impact on sperm quality (Study 6). OBJECTIVES FIRST: Perform a literature review where progress is exposed in the study of molecular and analytical epidemiology of contagious agalactia, control and approach future strategies in their research. SECOND: Study the distribution of Mycoplasma spp. in ear asymptomatic carriers bucks. THIRD: Develop a program of prevention and monitoring of caprine contagious agalactia in artificial insemination centers effective for detecting asymptomatic carrier bucks candidates to enter in the centers and present inside. FOURTH: To study the efficiency of systemic treatment with marbofloxacin to eliminate infection in naturally infected ear asymptomatic carriers bucks with Mycoplasma subsp. mycoides subsp. capri, evaluating its effect on sperm quality. FIFTH: Develop an experimental model for goat semen contamination with Mycoplasma spp., to evaluate its effect on the viability and motility sperm, as well as its impact on sperm quality under different conditions of carriage. http://www.google.com/url?source=transpromo&rs=rssf&q=//translate.google.com/community?source=all SIXTH: Evaluation of the Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides subsp. capri viability in diluted semen and their impact on sperm quality. CONCLUSIONS FIRST Systemic distribution of M. agalactiae and Mycoplasma mycoides subsp capri is confirmed in naturally infected ear asymptomatic carriers bucks. SECOND The presence of Ma and Mmc in the respiratory, digestive and urogenital system of asymptomatic carriers can be a risk factor for CA transmission by related secretions. THIRD Has been determined for the first time the presence of Mycoplasma mycoides subsp. capri in semen of asymptomatic bucks. FOURTH The combined of ear canal swabs and semen samples for the diagnosis of mycoplasma associated with CA is a useful tool to monitor the presence of asymptomatic carriers bucks in insemination centers. FIFTH Marbobloxacin systemic treatment was ineffective to eliminate Mycoplasma mycoides subsp. capri ear infections of naturally infected bucks while affecting sperm quality. SIXTH The survival as infective dose of Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides subsp. capri diluted semen for at least 150 minutes is a risk factor for venereal transmission. SEVENTH Under the conditions studied, the seminal dose decreases the viability of Mycoplasma agalactiae while ejaculated is a medium that favors their growth, suggesting that natural breeding can increase the possibilities of venereal transmission of caprine contagious agalactia regarding the use of artificial insemination.
  • Thumbnail Image
    Publication
    Open Access
    Implicación epidemiológica de carnívoros silvestres de ambientes atlánticos en el mantenimiento y dispersión de Escherichia coli, Trichinella SPP y Ectoparásitos
    (2016-03-01) Díaz Alcázar, Eduardo Alfonso; Martínez-Carrasco Pleite, Carlos; López Becerro, Ana Mª; Mora Gutiérrez, Azucena; Facultad de Veterinaria
    El aumento de la población humana está provocando la invasión de diferentes ecosistemas y, con ello, un mayor contacto entre la fauna silvestre, doméstica y el hombre. Algunas especies de carnívoros generalistas han sido capaces de adaptarse con éxito a los entornos antropogénicos, incrementando sus poblaciones; el hecho de que estén situadas en lo alto de la cadena trófica, que sean más longevas y con mayor capacidad de dispersión que otras especies, hace que estos carnívoros actúen como bioacumuladores y potenciales transmisores de agentes infectocontagiosos. El objetivo del presente estudio fue demostrar el papel epidemiológico de los carnívoros generalistas autóctonos y alóctonos en el mantenimiento y dispersión de algunos patógenos multihospedador zoonósicos en áreas bioclimáticas atlánticas. Una parte del presente estudio se ha realizado en Galicia, donde existe uno de los porcentajes más altos de población rural de España y de ganadería tradicional extensiva y semiextensiva, además de mantener una de las mayores densidades de lobo ibérico (Canis lupus signatus) y zorro rojo (Vulpes vulpes) de la Península Ibérica. En primer lugar se investigó la presencia de cepas de E. coli verotoxigénicas (ECVT) en 260 muestras fecales de zorros mediante cultivo selectivo y detección por PCR de genes del patotipo. Resultaron positivos el 6,1% de los ejemplares muestreados, con un total de 6 cepas ECVT diferentes; 3 de las 6 cepas ECVT (O5:HNM, O98:[H21] y O146:[H21]) mostraban perfiles genéticos similares a otras cepas ECVT de patología humana aisladas en el mismo área geográfica; y lo que es más importante, el perfil de macrorrestricción de la cepa O5:HNM aislada de zorro mostró una similitud superior al 89% con una cepa de origen humano y una cepa aislada de carne de vacuno. Estos resultados ponen de manifiesto el papel del cánido como portador y potencial transmisor de seropatotipos implicados en casos clínicos en el noroeste peninsular. En segundo lugar, se investigó mediante digestión artificial la presencia de larvas de Trichinella spp. en 100 lobos y 1.196 zorros, resultando positivos el 3% y el 0,73%, respectivamente. Se confirmó mediante PCR múltiple la presencia de T. britovi y T. spiralis en lobos, así como T. britovi en zorros. Tanto la prevalencia como el mayor número de especies de Trichinella identificadas, confirman que el lobo es el principal bioacumulador del parásito y, por tanto, la especie de elección a la hora de investigar su epidemiología en el ciclo selvático gallego. En tercer lugar se estudió la presencia de ectoparásitos en 224 zorros de Galicia, obteniendo resultados positivos en el 75,9% de los ejemplares. Se identificaron 4 especies de garrapatas (Ixodes hexagonus, Dermacentor reticulatus, Ixodes ricinus y Rhipicephalus turanicus) y 6 de pulgas (Ctenocephalides canis, Ctenocephalides felis, Pulex irritans, Paraceras melis, Archeopsylla erinacei y Spilopsyllus cuniculi), algunas de ellas parásitos habituales de otras especies de mamíferos con las que el zorro comparte el territorio. Este hecho pone de manifiesto la relación existente entre los hospedadores de las diferentes especies de ectoparásitos que coexisten en nuestra zona de estudio, así como el papel del zorro como hospedador, y dispersor, de estos. Por último, con el fin de determinar cuál es el efecto de la insularidad sobre la riqueza de ectoparásitos en un carnívoro alóctono en ambientes atlánticos, se analizaron 48 gatos asilvestrados (Felis catus) de la isla de Corvo (Azores). La escasa riqueza de especies detectada, Ctenocephalides felis (91,6%) y Rhipicephalus turanicus (10%), confirma que el aislamiento geográfico puede reducir drásticamente el número de especies de ectoparásitos presentes en un carnívoro generalista. Los resultados obtenidos confirman también la relación existente entre los hospedadores de diferentes especies de ectoparásitos que coexisten en la isla y la riqueza detectada. SUMMARY The rising human population and its huge use of natural resources are triggering human invasion of several ecosystems. Consequently, there is a greater contact between wildlife, domestic animals and man himself, and more intra- and inter-specific transmission of infectious agents. Some generalist carnivore species have increased their populations due to their successful adaptation to anthropogenic environments. As these species are positioned on the top of the food chain, are long-lived and have greater dispersion capacity than other species, these carnivore species act as bio-accumulator and potential transmitters of many infectious agents. Our study aims to demonstrate the epidemiological role played by native and non-native generalist carnivore species in the maintenance and spread of some multi-host zoonotic pathogens in Atlantic bioclimatic areas. It has been partially conducted in Galicia, a Spanish area with one of the highest rural population and traditional extensive and semi-extensive livestock raising. Moreover, Galicia shows the highest density of Iberian Wolf (Canis lupus signatus) and Red Fox (Vulpes vulpes) in the Iberian Peninsula. The presence of verotoxigenc E. coli (VTEC) was evaluated in 260 fecal samples from foxes, using specific cultures and further PCR on the confluent growth of those crops. A result of 6.1% of positive samples was obtained from a total of 6 different VTEC strains. Characterization and comparison of these revealed that 3 of the 6 strains isolated from foxes VTEC, belonging to serotypes O5:HNM, O98: [H21] and O146: [H21], showed genetic profiles similar to other human pathology VTEC strains isolated in the same geographic area; and what is more important, the profile of macrorrestricción of the O5:HNM strain isolated from Fox showed a similarity over 89% with a human strain and a strain isolated from beef.. These results highlight the role of canids as carriers and possible transmitters of seropathotypes involved in clinical cases in the peninsular northwest. A total of 100 wolves and 1,196 foxes were analyzed for Trichinella spp. larvae detection using an artificial digestion method. Trichinella britovi and T. spiralis in wolves, and T. britovi in foxes were identified in 3% and 0.73% positive samples respectively.The prevalence and the largest number of Trichinella spp. identified in wolves, indicate that this carnivore is the main bioaccumulator and, therefore, the target species to investigate in the epidemiology of the Trichinella sylvatic cycle in Galicia. The prevalence of ectoparasites was studied on 224 foxes, obtaining a result of 75.9% of parasitized animals. Four species of ticks (Ixodes hexagonus, Dermacentor reticulatus, Ixodes ricinus and Rhipicephalus turanicus) and six flea species (Ctenocephalides canis, Ctenocephalides felis, Pulex irritans, Paraceras melis, Archeopsylla erinacei and Spilopsyllus cuniculi) were identified. Some of these species are able to parasitize other mammals that share the same habitat. This fact shows the relationship between hosts of different ectoparasite species that coexist in our study area, as well as the role of the fox as a host and dispersal agent of these. Finally, 48 feral cats (Felis catus) were analyzed on the island of Corvo (Azores) to determine the effect of insularity on the ectoparasite richness of non-native carnivores in Atlantic environments. The low species diversity detected, Ctenocephalides felis (91.6%) and Rhipicephalus turanicus (10%), confirms that geographical isolation can reduce drastically the number of ectoparasite species on generalist carnivores. The obtained results also confirm the relationship between the different ectoparasite species host that coexist in the island and the detected parasite abundance.
  • Thumbnail Image
    Publication
    Open Access
    Tipificación molecular y mecanismos de resistencia antimicrobiana en micoplasmas asociados a la agalaxia contagiosa
    (Universidad de Murcia, 2018-12-21) Tatay Dualde, Juan; Sánchez López, Antonio; Fé Rodríguez, David Christian de la; Amores Iniesta, Joaquín; Escuela Internacional de Doctorado
    La presente tesis doctoral se ha realizado en formato de compendio de publicaciones y los artículos que la conforman tienen el objetivo común de evaluar distintas técnicas disponibles para la detección de M. agalactiae en muestras de leche de cabra, así como la tipificación molecular de las cepas circulantes y los mecanismos de resistencia antimicrobiana de las micoplasmas causantes de la agalaxia contagiosa. De esta forma, los objetivos específicos y la metodología seguida fueron: 1) Evaluar los límites de detección de las técnicas de cultivo microbiológico y PCR empleadas para la detección de M. agalactiae en muestras de leche de cabra inoculadas experimentalmente; 2) Determinar la concordancia entre las técnicas de cultivo microbiológico y PCR utilizadas para detectar M. agalactiae en muestras de mamitis procedentes de rebaños caprinos crónicamente infectados; 3) Evaluar la variabilidad genética de cepas de campo de M. mycoides subsp. capri y M. capricolum subsp. capricolum con diferentes características epidemiológicas procedentes de áreas endémicas de agalaxia contagiosa; 4) Evaluar la susceptibilidad in vitro a diferentes antimicrobianos de cepas de M. capricolum subsp. capricolum aisladas en España e Italia y 5) Estudiar la importancia de los genes de la región QRDR en el aumento de la resistencia a quinolonas así como determinar las mutaciones específicas que nos aportan información acerca de la susceptibilidad a quinolonas de las cepas de M. agalactiae y M. capricolum subsp. capricolum. Los resultados obtenidos permiten concluir que: 1) En muestras de leche de cabra, la técnica del cultivo microbiológico presenta un límite de detección de M. agalactiae inferior al obtenido por la PCR. Por lo tanto, en muestras de leche de tanque se recomienda la realización del diagnóstico mediante cultivo, mientras que en muestras de mamitis clínicas ambas técnicas presentan una buena concordancia; 2) Los esquemas de MLST son una herramienta útil para la detección de diferencias genéticas entre aislamientos de M. mycoides subsp. capri procedentes de distintos orígenes geográficos. Asimismo, esta técnica permite detectar diferencias entre cepas presentes en un mismo rebaño al mismo tiempo; 3) M. mycoides subsp. capri y M. capricolum subsp. capricolum presentan una gran variabilidad genética entre cepas aisladas en una misma área endémica de agalaxia contagiosa, mayor que la observada anteriormente en otras especies de micoplasmas como M. agalactiae; 4) No existe una relación directa entre la evolución filogenética de las cepas de M. capricolum subsp. capricolum y sus perfiles de susceptibilidad a distintos antimicrobianos; 5) La doxiciclina es el antimicrobiano más eficaz para inhibir el crecimiento de las cepas estudiadas de M. capricolum subsp. capricolum. Asimismo, algunos de los aislamientos analizados resultaron ser resistentes a quinolonas y macrólidos; 6) El aumento de la resistencia a quinolonas en M. capricolum subsp. capricolum y M. agalactiae se debe a la aparición de mutaciones en los genes que codifican la DNA girasa y la topoisomerasa IV bacterianas y 7) El gen parC es el que aporta mayor información acerca de la susceptibilidad a quinolonas de M. capricolum subsp. capricolum y M. agalactiae.