Estudio cinético de la fase de transición del mecanismo trisustrato hexa uni ping-pong.

Abstract

El estudio cinético de las reacciones enzimáticas trisustrato se ha llevado a cabo bajo la aproximación del estado estacionario, la expresión de la ecuación de velocidad y sus distintas representaciones gráficas permiten distinguir entre los posibles mecanismos y obtener los parámetros cinéticos (KM y V^^,) que caracterizan al enzima actuando sobre los distintos sustratos (1-4). Sin embargo el enfoque en fase de transición, consigue una información más profunda sobre las distintas etapas del ciclo catalítico que tiene lugar en la transformación de los sustratos a productos. Estudios cinéticos en fase de transición, se han realizado fundamentalmente con reacciones enzimáticas monosustrato y bisustrato (5) y también se ha aplicado a un mecanismo trisustrato ordenado tipo Theorell-Chance (6). El grupo de mecanismos tipo Ping-Pong en reacciones trisustrato es muy amplio (4, 7). Respecto a enzimas que siguen un mecanismo Hexa Uni Ping-Pong,mejor estudiado en estado estacionario es piruvato-fosfato diquinasa de Propionibacterium shermanii (8) y de Bacillus symbiosus (9) que cataliza la conversión de piruvato, ATP y Pi a fosfoenolpiruvato, AMP y PPi. El objetivo de nuestro trabajo es obtener las ecuaciones cinéticas de formación de los productos, válidas tanto para la fase de transición como para el estado estacionario correspondientes al mecanismo (I), y establecer un método para la determinación de todas las constantes de velocidad implicadas en él, a partir de los perfiles concentracióntiempo de los productos, en el caso bastante frecuente de que en el sistema se den las condiciones de equilibrio rápido en la unión de los distintos sustratos